Как открыть хостел | HowToHostel Как открыть хостел … 
Минторг США заявил, что Пекин мешает покупке авиаперевозчиками КНР американских самолетов — Экономика и бизнес
ВАШИНГТОН, 29 сентября. /ТАСС/. Власти Китая препятствуют закупке китайскими авиаперевозчиками самолетов американских производителей. С таким утверждением министр торговли США Джина Раймондо выступила во вторник на конференции, организованной Экономическим клубом Вашингтона.
Ее спросили о пошлинах, введенных Вашингтоном в отношении некоторой продукции из КНР при предыдущей администрации. «Пошлины — это тактика, а не стратегия. Пошлины — это один из инструментов в нашем наборе», — ответила на это глава Минторга.
Она подчеркнула, что Вашингтону нужна «стратегия в отношении Китая». «Они не соблюдают договоренности о закупке [продукции у американских производителей] в рамках первой фазы [торговой сделки с США] <…>. Я не знаю, есть ли здесь [на конференции] представители [американской компании] Boeing, но, знаете, китайские авиаперевозчики хотят купить самолеты на десятки миллиардов долларов, китайское правительство стоит на пути этому», — утверждала Раймондо. Каких-либо подробностей она приводить не стала.
«В любом случае китайская сторона должна играть по правилам, мы должны <…> привлекать их к ответственности. Если этого не может произойти, то нам нужно изучать другие меры, более агрессивные, однако прямо сейчас <…> нам нужны крепкие торговые отношения с ними, которые не наносят вреда нашей национальной безопасности», — добавила министр торговли.
В июне Раймондо в интервью агентству Bloomberg сообщала, что администрация США ведет переговоры с Китаем о продаже авиалайнеров Boeing 737 MAX. Китай стал первой страной, приостановившей в марте 2019 года эксплуатацию самолетов Boeing 737 MAX после двух крупных авиакатастроф. И использование авиалайнеров в КНР по-прежнему запрещено.
В октябре 2018 года Boeing 737 MAX индонезийской компании Lion Air упал в Яванское море вскоре после вылета, погибли все 189 человек, находившихся на борту. Вторая катастрофа с самолетом этой модели произошла в марте 2019 года в Эфиопии, в ней погибли 157 человек.
Китайско-американские торгово-экономические трения
Администрация предыдущего президента США Дональда Трампа развязала торговую войну с КНР. Вашингтон ввел пошлины на импорт китайских товаров на сумму $370 млрд. Как утверждает агентство Reuters, с июля 2018 года из-за этой меры американские импортеры потеряли $71,6 млрд.
15 января 2020 года стороны договорились в Вашингтоне по первой фазе торговой сделки. Согласно решению, Китай согласился увеличить закупки американской продукции на $76,7 млрд и $123,3 млрд соответственно в течение первого и второго года действия соглашения.
Год назад тогда еще кандидат на пост президента США Джо Байден заявил, что, по его мнению, первая фаза торговой сделки с КНР «провалилась». Однако в декабре, уже после победы на президентских выборах, он объявил, что не планирует «каких-либо незамедлительных действий» для внесения в нее изменений.
Пустые полки и рост цен. Как повальный дефицит мешает миру оправиться от коронакризиса
- Алексей Калмыков
- Би-би-си
Автор фото, AFP
Подпись к фото,То аврал, то локдаун. Мировая торговля еще не скоро вернется в доковидную эру
Мир немного оправился от ковида и приготовился наверстать упущенное. Снова в отпуск, снова тратить, нанимать, богатеть. Но не тут-то было. Оказалось, что мировая экономика не готова к бурному росту.
В магазинах пустуют полки, в барах заканчивается пиво, месяцами приходится ждать мебель, машину или холодильник. Бум застал бизнес врасплох. Не хватает всего: сырья и чипов, фур и контейнеровозов, а главное — работников, готовых вернуть экономику к жизни после полутора лет летаргического ковидного сна.
Ещё недавно международные организации обещали, что упущенное можно будет в целом наверстать к 2023 году. Тогда мировая экономика выйдет на докризисный уровень, после чего благосостояние населения всех стран мира снова начнет расти, пусть и с разной скоростью.
Но прогнозы разбились о суровую реальность. Мир оказался не готов к восстановлению.
Деньги есть, товаров нет — бизнес просто не успевает их произвести и доставить. Тотальный дефицит сдерживает экономический рост, разгоняет инфляцию и мешает выйти из кризиса всем — и развитому привитому Западу, и развивающимся странам, где со смертностью и вакцинацией по-прежнему неважно.
Чего именно не хватает и почему — разбиралась Русская служба Би-би-си.
Нет рук
Автор фото, Getty Images
Подпись к фото,Карьера дальнобойщика не пользуется популярностью, выяснили британские перевозчики
Полтора года пандемии проредили армию работников на планете. Кто-то умер, кто-то не доучился, кто-то пересмотрел жизненные ориентиры. Предложение рабочей силы сократилось.
Спрос на работников тоже уменьшился: за время пандемии были потеряны сотни миллионов рабочих мест, и до сих пор их примерно на 110 млн меньше, чем до ковида. Однако одно другое не компенсирует: потерявший работу дизайнер не всегда готов заменить уехавшую из страны санитарку.
В итоге целые когорты специалистов пополняют ряды безработных или вовсе выбывают из рабочей силы, а целые отрасли, вроде гостиничного бизнеса или транспорта, сталкиваются с дефицитом работников. То есть одновременно сокращаются и доходы населения, и прибыль бизнеса, и налоги, и потребление, и сбережения — экономика тормозит.
Дошло до того, что даже страны с обостренной неприязнью к миграции приоткрывают границы. Венгрия — бастион антииммигрантских настроений в Европе, допустила наем высококвалифицированных специалистов из дальнего зарубежья — правда, не на постоянную работу и не напрямую, а через аутсорсинговые агентства.
Братья венгров по духу британцы пока держатся. Правительство Бориса Джонсона пришло к власти под флагами брексита и решительно отказывается делать исключения из ужесточенных всего несколько месяцев назад иммиграционных правил, несмотря на плач бизнеса. Даже те предприниматели, которые активно поддерживали брексит, теперь вымаливают временные визы для низкоквалифицированной, но высокодефицитной рабочей силы.
Исход европейцев оставил Великобританию без водителей, поваров, строителей и живодеров. Заместить их местными работниками оказалось невозможно: британцы не спешат заполнять вакансии дальнобойщиков, не бегут наниматься на стройку или скотобойню.
Автор фото, Getty Images
Подпись к фото,Пустыми полками в Британии уже давно никого не удивишь. Пандемия усугубила проблемы брексита
Компании вынуждены повышать зарплаты и выплачивать бонусы: сети супермаркетов Tesco и электроники Dixons Carphone обещают по 1,5 тысячи фунтов тем, кто придет к ним работать водителем, и своим, чтобы не уходили к конкурентам. Amazon платит тысячу фунтов при найме работников в некоторые распределительные центры.
Прекрасно, радуются чиновники, наконец зарплаты вырастут, а с ними благосостояние населения и налоги в казну.
Ничего хорошего, парируют критики — число работников от этого не увеличивается, компании просто перекупают существующих друг у друга. Это — новые затраты на поддержание, а не расширение бизнеса, и вслед за издержками неизбежно вырастут цены, предупреждают они.
Тем более, что помимо рабочей силы бизнесу приходится больше тратиться еще и на сырье, комплектующие, перевозку и складирование.
Нет сырья
Мало испечь пиццу, снести яйцо или написать книгу — все это нужно упаковать, чтобы продать. А теперь это дорого или недоступно, поскольку вслед за спросом взлетели цены на макулатуру, кукурузный крахмал и прочее сырье, применяемое в упаковке.
И это лишь один пример. Другой, на слуху, — чипы.
Полупроводников недостает до такой степени, что ведущий мировой автопроизводитель Toyota сократил выпуск машин на 40% и закрыл 14 заводов в Японии. На дефицит чипов сетуют все подряд: от американских Ford и GM до китайской Geely и Jaguar Land Rover, британского подразделения индийской Tata Motors.
Автор фото, AFP
Подпись к фото,Пандемия обнажила зависимость Европы и США от поставок чипов из Азии. Теперь они пытаются воссоздать собственную микроэлектронику. Фабрика чипов Bosch в Дрездене
Дело не только в повышенном спросе, но и в перебоях с предложением, поскольку мощности в Таиланде, Вьетнаме, Малайзии, на Тайване и Филиппинах простаивают из-за периодических локдаунов.
Или вот взять хотя бы отделочные работы. У британских спецов квартирного и офисного ремонта есть отраслевая организация, и она жалуется на дефицит всего после ковида. Нет шурупов и гвоздей из-за дефицита стали, алюминий подорожал на 20%, цены на медь бьют рекорды, как и сроки поставки цемента, утеплителя, фанеры и вообще всего, что используется в ремонте.
А все потому, что мир привык к доковидной глобализации, а пандемия изменила все — доставка сырья и комплектующих из Азии стала намного сложнее и дороже.
Нет фур, вагонов и контейнеров
Ситуация усложняется периодическим закрытием китайских портов на карантин по малейшему поводу. Так, в августе власти КНР на две недели опечатали контейнерный порт Нинбо-Чжоушань, входящий в тройку крупнейших в мире, как только там диагностировали первый и единственный случай «Дельта»-варианта коронавируса.
Не все оптовые покупатели готовы оплачивать дорогую доставку, поскольку не уверены, что смогут повысить собственные розничные цены и отбить затраты. Поэтому непортящиеся товары томятся на складах, и без того забитых под завязку.
Решить проблему за счет увеличения предложения быстро не получится: даже на расширение складских помещений уходят месяцы согласований и строительства. Что уж говорить о расширении торгового флота — это вообще дело многих лет, и желающих рискнуть заложить десяток-другой контейнеровозов в расчете на сохранение повышенного спроса к моменту, когда их спустят на воду, пока не видно.
Автор фото, AFP
«Проблема заторов в мировой товарной цепи вряд ли решится в ближайшее время, особенно в момент, когда ключевые экспортеры вроде Вьетнама и Индонезии пытаются обуздать распространение «Дельта»-варианта, — говорит главный азиатский аналитик Bloomberg Economics Чанг Шу. — Поставки срываются, цены растут. Это притормозит восстановление мировой экономики, но вряд ли остановит его».
Итог: все дорожает
Главный итог дефицита, традиционно — рост цен. Он сдерживает восстановление и тем, что подавляет спрос, и тем, что заставляет центробанки и власти сокращать денежное стимулирование экономики за счет дешевых кредитов и казенных субсидий.
Дорожает все, особенно еда. Растут цены на пальмовое масло, кофе, сахар, апельсины, зерно. И это только начало.
«Очень вероятно, что инфляция потребительских цен на продовольствие ускорится в конце 2021 года и в 2022-м», — полагают экономисты Международного валютного фонда.
По их прогнозам, повышение оптовых цен на четверть в 2021 приведет к росту розничных примерно на 5% в ближайшие два года, и еще около 1% к ценам еды в магазинах добавят подорожавшие перевозки.
Автор фото, Getty Images
Подпись к фото,Работникам кофейных плантаций в Никарагуа не перепадет ни цента от подорожания кофе на мировом рынке
И это при том, что главная проблема — пандемия — вовсе не рассосалась. За углом поджидает новая угроза — мутации вируса и зима, сезон респираторных инфекций в северном полушарии.
Опросы бизнеса и потребителей на Западе показывают, что восстановление тормозит там, где оно началось на волне вакцинации, — в США и Великобритании, поскольку они уже столкнулись с дефицитом. В Японии и Австралии тоже непросто из-за «Дельты». А вот в Евросоюзе, который долго запрягал, но сейчас уже вакцинирует население быстрее, экономика растет пока уверенно.
То есть главная угроза восстановлению мировой экономики прежняя — не дефицит и перебои, а вирус. И пусть при нынешней динамике событий нас ждут полупустые полки под Рождество и на Новый год, общая картина выглядит менее трагично, чем год назад, когда из-за вируса все сидели по домам, не тратили, не нанимали и не инвестировали.
Теперь все смотрят в будущее пусть с опаской, но оптимистичнее. Мир постепенно приспосабливается к жизни с вирусом и восстанавливается после ковида, просто не так быстро как всем бы хотелось. Но все же бизнесу и потребителям милее рост с препятствиями, чем беспрепятственное падение.
«Да, нас ждут перебои на Рождество, — сказал в интервью Би-би-си глава одной из крупнейших сетей супермаркетов в Британии Tesco Джон Аллан. — Но не стоит превращать скромный кризис в трагедию».
Что мешает жить вечно — Ведомости.Город
В нашем организме есть много механизмов, поддерживающих равновесие: температура 36,6, давление 120/80, РН 7,35-7,45 и другие. И у каждого механизма есть некий динамический диапазон стрессоустойчивости. Например, можно переехать в среднегорье и адаптироваться к этой среде. Но на высоте более 6000 м адаптироваться уже будет проблематично. Или, например, в пустыне почки начинают концентрировать мочу сильнее, чтобы избежать обезвоживания.
Если механизмы поддержания равновесия недостаточно развиты, то чрезмерный стрессор – тот же самый коронавирус – может нас убить. Механизмы поддаются тренировкам в некоем пределе, чем с успехом пользуется, например, спортивная и горная физиология. Однако с возрастом наша способность поддерживать равновесие снижается. Причина тому — накопления различных повреждений, против которых ни наш организм, ни современная медицина ничего не могут сделать. Это и есть старение и ответ на вопрос, что мешает нам жить вечно.
Есть и хорошая новость: эти повреждения хорошо известны, каталогизированы и описаны в научных статьях. Следующий логический шаг — разработка терапии против каждого повреждения и биомаркера, то есть некоего измеряемого параметра, взглянув на который мы можем оценить, сработала терапия или нет. И, наконец, испытание этой терапии в лабораторных условиях.
На фундаментальном уровне внутри организма происходят случайные неферментативные модификации долгоживущих белков межклеточного матрикса, и это уже в свою очередь может спровоцировать клеточное старение, подробно описанное в исследовании Hallmarks of aging, опубликованном на PubMed, и концепции SENS.
Против данного фактора старения, к сожалению, пока нет терапий. На данный момент лишь одна биотехнологическая компания занимается поиском средства от глюкозепана — конечного продукта гликирования у людей, который сшивает долгоживущие белки межклеточного матрикса.
Современные ученые с успехом научились справляться с таким старческим процессом, как накопление сенесцентных (старых) клеток, что дало мышам увеличение продолжительности жизни до 36%. Сенолитик — вещество, вызывающее гибель таких клеток — под названием FOXO4-DRI позволил улучшить пожилым мышам состояние волосяного покрова и почечную функцию, а другой сенолитик, фисетин, понизил риск умереть от коронавируса. Один из крупнейших частных исследовательских центров «Клиника Мэйо» тестирует сейчас это вещество на людях.
Однако сенесцентные клетки лишь один, и далеко не самый фундаментальный, фактор старения, и мыши, получающие такую терапию, хоть и жили дольше, но умирали от старости.
Накопление неправильно свернутых белков, амилоидов, — еще один тип накапливающихся старческих повреждений. Так, бетаамилоид ассоциирован с болезнью Альцгеймера, а транстиретиновый амилоид рассматривается как одна из фундаментальных причин смерти сверхдолгожителей, этот белок накапливается в том числе в сердце и встречается после 85 лет у 25% людей, приводя к сердечной недостаточности. Препарат тафамидис был разработан относительно недавно и замедляет прогрессирование транстиретинового амилоидоза сердца, но для настоящего прорыва в этой области необходимы терапии, удаляющие его за счет курсового приема.
Еще один момент, почему мы до сих пор не победили старение: все зависимые от возраста ухудшения не рассматриваются медициной как болезнь, как что-то, с чем надо бороться. Например, менопауза, или старческое снижение максимального потребления кислорода, морщинистая кожа, даже старение иммунитета не являются сейчас болезнями.
Когда у человека в 80 лет нет деменции или легких когнитивных нарушений, то формально он здоров. Но его мозг работает очевидно хуже, чем в 20 лет, — кто совершил естественнонаучные открытия после 80? Конечно, так быть не должно. Должны быть созданы терапии, которые позволят вернуть молодость мозгу, и не только ему.
Мешает и низкая амбициозность многих антивозрастных ученых. Они делают аккуратные попытки имитировать фармакологически ограничение калорий или разработать миметики (имитаторы) физнагрузки, или обеспечить так называемое «здоровое старение», замедлить превращение в немощного старика. Но любой зожник, любой изнуряющий себя голодом человек в итоге все равно состарится и умрет.
Вместо попыток замедлить старение — за счет пожизненного приема лекарств, к тому же, — гораздо эффективнее за счет курсового приема откатить какие-то старческие повреждения вспять — и нет доказательств того, что это сделать сложнее. Мы живем в то время, когда может быть решена основная проблема человечества. Задача заключается в том, чтобы разработать терапии антистарения как можно быстрее.
Мнение редакции может не совпадать с точкой зрения автора.
Что мешает развивать производство фильмов в регионах ДФО — Российская газета
Кинопроизводство могло бы стать еще одним драйвером социально-экономического развития ДФО. Об этом заявили на ВЭФ-2021 участники сессии «Важнейшее из искусств: перспективы кинокластера на Дальнем Востоке».
Возможное строительство на острове Русском киностудии анонсировал еще экс-губернатор Приморья Сергей Дарькин в 2009 году. Тогда отношение большинства жителей края к идее было скептическим, мол, понятно, интересы семейные: супруга чиновника — прима Приморского академического театра драмы. О том, что кинопроизводство — категория еще и экономическая, никто не задумывался.
В настоящее время на Дальнем Востоке наблюдается высокий уровень интереса к киносъемкам со стороны российских и зарубежных режиссеров. Особенно интенсивно эта индустрия развивается в Республике Саха (Якутия), Бурятии и Приморском крае. Но если первые два региона снимают художественные фильмы собственными силами, то Приморье преимущественно предоставляет площадки — городские и природные — для съемок приезжим кинематографистам: японским, южнокорейским, российским. Впрочем, новейшая история края знает два-три примера снятых кинолент местными творцами, которые даже получили награды неких российских киносмотров. Но приморский кинематограф так и не родился.
— При всем признании природных красот Дальнего Востока и исторических поводов для хороших киносценариев о регионе надо сказать, что здесь нет специалистов, способных делать кино: кинооператоров, звукорежиссеров, осветителей, — считает генеральный директор киностудии «Ленфильм» Федор Щербаков.
Эту мысль поддержал сценарист и член Гильдии кинорежиссеров России Александр Мельник, заметивший, что «в отрасли есть тяжелый дефицит кадров, особенно на региональном уровне». Засчитать на свой счет этот упрек нынешние власти Приморья не могут: не они 25 лет назад развалили единственную на Дальнем Востоке студию «Дальтелефильм». И пусть ее специалисты — а среди них были и выпускники ВГИКа — снимали не игровые, а документальные фильмы, но помочь коллегам, пожелавшим сделать в Приморье художественное кино, они уж смогли бы.
Командировка из Москвы или Санкт-Петербурга в ДФО всей съемочной группы от осветителей до режиссеров и актеров требует огромных средств. Создать «вид» Владивостока в кинопавильонах куда дешевле.
Сегодня работать на местах крупным кинокомпаниям обычно помогают так называемые региональные кинокомиссии. Но кинематографисты из других округов страны не знают, к кому обратиться с просьбой посодействовать в организации съемочного процесса в Приморском крае. На киносессии ВЭФ даже возник спор, есть ли здесь кинокомиссия: Федор Щербаков был проинформирован, что нет, а худрук Приморского академического краевого драматического театра имени Максима Горького Ефим Звеняцкий уверял, что таковая работает.
Есть и успешные на внутреннем рынке проекты: якутские фильмы в Якутии зарабатывают больше «Трансформеров»
Между тем именно через кинокомиссии происходит возврат из бюджета региона части понесенных затрат производителя кино или телесериала за съемки на своей территории (практика рибейта).
— Эта система — привлекательная мера, которая в итоге окупается с лихвой. Киногруппы оставляют в регионе гораздо больше средств, чем бюджет тратит на эту поддержку. В Петербурге рибейты позволили привести в съемочные павильоны «Нетфликс» (стриминговый сервис, позволяющий смотреть удостоенные наград фильмы, сериалы, аниме, на тысячах устройств с подключением к интернету. — Прим. ред.), — говорит гендиректор «Ленфильма».
В Приморском крае есть опыт рибейта с фильмом «На районе», получившим 15-процентную субсидию на возмещение затрат за съемки во Владивостоке. Но назвать его успешным сложно.
— Данила Козловский снял, скажем так, не самый удачный фильм, хотя Владивосток в нем узнаваем. Говорить о том, что эта лента стала движущей силой развития территории, хотя была первой в истории России в практике регионального кинорибейта, нельзя. Этот важный механизм государственной поддержки творческих деятелей должен быть пересмотрен и модернизирован, — считает Ефим Звеняцкий.
Понятно, что выпустить картину, которая бы принесла денег больше, чем на нее потрачено, получается далеко не всегда.
— Мы пока не совсем научились делать на кино деньги. Но есть и успешные на внутреннем рынке проекты: в Якутии наши якутские фильмы зарабатывают больше «Трансформеров», — говорит генеральный директор АО «Корпорация развития Республики Саха (Якутия) Афанасий Саввин.
О северной республике сегодня говорят как о редком примере системно функционирующего локального кинематографа. Одним из самых успешных проектов с точки зрения маркетинга здесь стала практика, когда за каждым фильмом следует создание компьютерной игры, комиксов, сериалов, изготовление футболок, фигурок персонажей, и прибыль от реализации всего этого нередко в несколько раз превышает стоимость производства фильма.
Свой кинематограф сформировался и в Бурятии. В республике даже создана и соответствующая законодательная база.
— Здесь есть люди, есть идеи, есть все условия, чтобы развивать региональное кино. В этом нам поможет продвинуться решение трех первоначальных задач. Первое — создание некой институции с собственной материально-технической базой: съемочный павильон, офисы кинокомпаний, площадка для встречи талантов и продюсеров, формирование творческого сообщества. Второе — обеспечение профессиональными кадрами. Третье — использование системы рибейтов, — говорит генеральный директор ООО «Байкалкино» Дина Подпругина.
Так может ли кинопроизводство стать движущей силой развития территории? По словам того же Ефима Звеняцкого, «десять снятых на Дальнем Востоке кинолент изменили бы отношение к региону самих его жителей». А это бы уже в свою очередь повлияло на многое.
Дословно
Александр Мельник, кинорежиссер, сценарист, член Гильдии кинорежиссеров России:
— Было бы хорошо, если бы в формате Министерства РФ по развитию Дальнего Востока и Арктики было создано некое подразделение, структура, система, фонд или корпорация, которая могла бы регулировать процесс не только с точки зрения экономической рентабельности, но и с точки зрения тех рентабельностей, которые называются воспитательными, формирующими личность, общественное мнение и мировоззрение.
Алексей Романов, художественный руководитель ГНК «Сахафильм»:
— Я предлагаю создать ассоциацию Дальнего Востока. В нее войдут все учреждения, студии, дирекции фестивалей, отдельные продюсеры, представители отдельных кинематографистов. Нужно организовать справочный веб-сайт «Кинокластер Дальнего Востока», чтобы на нем всегда присутствовала информация: что происходит в целом на Дальнем Востоке в области кинематографии.
Селфи, кроссовки и образование. Что мешает талибам на пути в Средневековье? | В мире | Политика
Новый ректор Кабульского университета Мохаммад Ашраф Гейрат
Сиди дома, женщина!
Гейрат свои решения транслировал в Twitter: сначала объявил о запрете, а потом уточнил, что он временный, но пока женщины должны оставаться дома, а ислам превыше всего. Эти заявления противоречат словам нового афганского министра высшего образования Абдула Баки Хаккани, который в середине сентября обещал, что женщины смогут учиться в вузах, хоть и отдельно от мужчин. Тем более что перед началом учебного года талибы выпустили приказ, по которому женщины могут посещать высшие учебные заведения, если будут носить традиционную мусульманскую одежду, закрывающую все тело и лицо.
Впрочем, это ничего не значит, поскольку скотское отношение к женщинам талибы уже продемонстрировали не раз. После захвата Афганистана в середине августа руководители талибов отрицали, что страна вернется к порядкам, которые существовали при предыдущем правлении «Талибана». Однако первое, что они сделали, — это возвращение телесных наказаний и казней, а также запрет женщинам мыться (посещать хаммамы и другие общественные бани) и ходить на каблуках. Еще в первые дни после захвата власти один из главных «авторитетов» «Талибана» мулла Нуруддин Тураби заявил, что в Афганистан «вернулась справедливость» и нужно во всем навести порядок. В частности, женщинам он повелел не работать и любить мужа и детей.А дальше пошли конкретные запреты. 18 сентября они запретили девочкам — с шестого по двенадцатый классы — посещать среднюю школу. Мальчикам разрешили продолжить обучение. А в Кабуле женщинам частично запретили выходить на работу. Так, исполняющий обязанности мэра города Молави Хамдулла Номани
Новая власть уже закрыла Министерство по делам женщин, заменив его на Министерство по распространению добродетели и искоренению порока, разрешив там работать только мужчинам. 20 лет такое же министерство занималось насаждением строгих исламских правил и наложением жестких ограничений на женщин. По словам корреспондента Би-би-си Лиз Дусет, хотя лидеры талибов и признают, что за 20 лет мир изменился и они изменились тоже, несоответствие между обещаниями и проводимой политикой становится все более очевидным. В предыдущее правление талибов (1996-2001 годы) девочки вообще не могли посещать школу, а женщины — работать вне дома или появляться на публике без закрывающей все тело одежды и сопровождения мужчин. Нарушителей публично пороли или казнили.
Бородатые мужчины в тюрбане
Запреты талибов коснулись и мужчин. Как сообщила газета Ettelaat, им в Афганистане запретили брить бороды и ходить в барбершопы, а также включать громкую музыку, объяснив это требованиями норм ислама.
Изначально запрет был введен в южной афганской провинции Гильменд, но его постепенно распространят на всю страну. И, хотя стали поступать какие-то робкие официальные опровержения, барбершопы начинают закрываться, а их владельцы рассказывают, что разорены. И без официального запрета на бритье афганские парикмахерские теряют клиентов. Якобы из-за давления местные жители стремятся быть похожими на талибов.
«Культура барбершопов была популяризирована при режиме экс-президента Ашрафа Гани, поскольку он пытался в какой-то степени вестернизировать Кабул. Но, думаю, сейчас это уже будет крайне неактуально. Талибы будут вынуждать мужчин носить бороды средневекового типа: они опираются на шариатскую форму ислама и, к сожалению, не совсем правильно интерпретируют строки из Корана, которыми все это предписывается, — говорит эксперт Международного дискуссионного клуба „Валдай“, политолог Фархад Ибрагимов. — Это самое что ни на есть насилие, и международное сообщество будет на это указывать. Но это ни к чему не приведет: талибы — главная власть в Афганистане, они насаждают свои правила населению согласно своим традициям и обычаям. И здесь удивляться ничему не стоит».
Никто и не удивился, когда министр обороны нового афганского правительства Мавлави Мохаммад Якуб
обнародовал распоряжение, запрещающее боевикам движения «Талибан» делать селфи и выкладывать их в соцсетях. Дело в том, что многие бойцы впервые попали в большой город и проявили детский восторг от опустевших парков развлечений. Они катались на лодочках и аттракционах, снимали это на видео и фотографировали, а затем выкладывали в соцсети. Министр Якуб запретил солдатам так позориться. Тем более что, по его словам, это может угрожать безопасности, раскрывая местонахождение войск и руководителей движения.Заодно министр запретил своим бойцам носить западную одежду, не соответствующую канонам ислама. В частности, белые кроссовоки, которые местные жители называют «гепардами», и зеркальные солнечные очки. «Так ведут себя полководцы и бандюки марионеточного режима», — цитирует Мохаммада Якуба The Wall Street Journal. А боевикам объяснили все попроще: это, мол, пропагандирует американскую моду. «„Талибан“ меняет наш образ жизни, это не нравится ни мне, ни кому-либо их моих друзей. До талибов люди носили джинсы, рубашки, футболки, теперь это запрещено. Все должны использовать традиционную афганскую одежду, например тюрбан. Если выйти на улицу в западной одежде, талибы скажут: „Ты нарушаешь закон, ты должен отправиться в тюрьму“», — рассказал «Ъ FM» анонимный житель Кабула.
«Под запретом может оказаться что угодно. Для женщин уже все было озвучено: они не смогут работать. Мужчинам можно будет работать в соответствии с теми правилами и законами, которые будут устанавливать талибы. Это жесткая власть, которая не даст проходу ни одному афганцу. Если кто-то попытается что-то сделать по-своему, то ему грозит неминуемая смерть. Тем более что они будут вводить практику смертной казни, практику отсечения конечностей», — считает Фархад Ибрагимов.
Смертная казнь и королевская Конституция
О намерении вернуть смертную казнь и отрубание рук в интервью The Associated Press рассказал министр тюрем в нынешнем правительстве Афганистана Нуруддин Тураби
. Он посоветовал мировой общественности не вмешиваться во внутренние дела страны и не указывать новым властям, как им поступать. «Мы поступаем так, как велит ислам, и мы создаем законы в соответствии с Кораном», — завил он. По мнению Тураби, «отрубание рук крайне необходимо в интересах укрепления безопасности». В настоящее время, сказал он, кабинет министров нового правительства рассматривает вопрос о том, проводить наказания и казни публично или нет, и «разрабатывает соответствующий закон».При этом министр настаивает, что талибы изменились по сравнению с девяностыми, поэтому сейчас они не будут запрещать телевидение, мобильную связь, фотографии и видео, «потому что это необходимо людям и мы относимся к этому серьезно». Он добавил, что казни можно будет снимать на видео или фотографировать и показывать другим, чтобы неповадно было совершать преступления.
Самое поразительное, что «Талибан» раздумывает над возвращением Конституции времен последнего короля страны
«Талибам хотелось бы, чтобы в Конституции все было по законам шариата. Но, скорее всего, давление международного сообщества заставит их найти компромиссный вариант. Может быть, они возьмут за основу этот вариант Конституции и начнут его как-то корректировать. Но в любом случае они наверняка сделают так, чтобы их ценности доминировали», — уверен директор Центра изучения современного Афганистана Омар Нессар.
То есть женщинам, да и мужчинам, не поддерживающим талибов, в обозримом будущем рассчитывать на послабления не приходится. А вот новых запретов, которые стремительно возвращают страну в Средневековье, ожидать можно.
Интерфакс-Недвижимость / Охранный статус домов-памятников мешает созданию комфортных условий — Матвиенко
29 сентября 2021, 18:05
Фото: Кадр видеозаписи на сайте Совета Федерации
Ярославль. 29 сентября. ИНТЕРФАКС-ЦЕНТР — Охранный статус жилых домов, относящихся к объектам культурно-исторического наследия, мешает созданию комфортных условий для живущих в них граждан, заявила председатель Совета Федерации Валентина Матвиенко в Ярославле на VIII форуме «Культурно-историческое наследие России».
По ее словам, в стране свыше 8 тыс. многоквартирных жилых домов относятся к зданиям, представляющим культурно-историческую ценность. Наибольшее число таких объектов — более 700 — сосредоточено в северной столице.
«Я знаю, как бывший губернатор, как непросто решать эти вопросы. Охранный статус этих домов и связанные с ним ограничения часто препятствуют их нормальному содержанию, созданию комфортных условий проживания людей. В результате люди сегодня живут в неподобающих условиях, с изношенными коммуникациями, без элементарных бытовых удобств, без горячей воды и так далее. Это острый вопрос, требующий, конечно, очень тонкого, грамотного решения», — сказала Матвиенко.
По ее мнению, задача государства — создать прозрачные правовые механизмы, позволяющие не только сохранить памятники архитектуры, но и обеспечить достойные условия для проживания в них.
«Насколько мне известно, соответствующий законопроект уже подготовлен министерством культуры РФ, мы ожидаем его скорейшего внесения в парламент», — сказала Матвиенко.
Ранее первый заместитель министра строительства и ЖКХ РФ Александр Ломакин заявил, что имеющие охранный статус объекты культурного наследия могут разрешить включать в проекты комплексного развития территорий (КРТ).
«Мы сегодня с Минкультуры прорабатываем ряд поправок в законодательство, которые позволят сократить охранные зоны, которые позволят вовлекать их в развитие территорий. Различными способами», — заявил Ломакин.
Он пояснил, что при реализации первых проектов КРТ возникли ситуации, когда на территории оказывались объекты, которые имеют статус памятников или историческое значение.
«И мы понимаем, что из-за этого может развалиться именно комплексность развития территории. (…) Мы прорабатываемся различные варианты вовлечения, ведь если мы посмотрим практику европейских стран, там ведь тоже много исторических культурных объектов, однако коллеги их научились интегрировать в современное городское пространство», — пояснил замминистра.
Что мешает российскому бизнесу выполнять заказы военных на беспилотники
БЛА из «Кронштадта»
Самая внушительная экспозиция беспилотных систем была показана на форуме «Армия-2021» компанией «Кронштадт». На статической площадке были выставлены средневысотные разведывательно-ударные БЛА большой продолжительности полета «Орион» и «Сириус».
Следует, правда, отметить, что «Орион» создан по техническому заданию в 2011 году и его потенциала уже не всегда достаточно для решения задач, которые стоят перед беспилотниками подобного класса. Тяжелый БЛА «Сириус» – следующая ступень в развитии этого семейства, но пока он находится на стадии опытно-конструкторской работы.
БЛА «Сириус» и родственный ему «Гелиос» представляют собой дальнейшее развитие линейки «Орионов». Можно сказать, это «дети» «Ориона». Высокая степень унификации аппаратов позволила создать новые БЛА в короткие сроки.
Однако Россия по-прежнему в роли догоняющего игрока на этой сцене, и положение дел в отрасли не изменилось.
«Пока создавали «Орион», был совершен существенный скачок в развитии средств связи, вычислительной техники всех типов», – рассказывает собеседник «Газеты.Ru» в оборонно-промышленном комплексе.
Сейчас БЛА, как правило, функционируют в автоматическом режиме под присмотром человека-оператора. Сегодня Министерством обороны ставится следующая задача – получение на выходе автономных систем, работающих в отрыве от человека-оператора. Человек-оператор – это радиолиния управления, определенные ограничения по дальности, скорости. Кроме того, противник обладает возможностями воздействия на каналы управления и их подавления
Именно поэтому возник проект беспилотного летательного аппарата «Гром», который также разрабатывается компанией «Кронштадт». «Это следующее поколение, следующий вектор работы. Последние достижения в области сенсоров и вычислительной техники позволяют перейти к использованию искусственного интеллекта, то есть к выполнению задач, не прямо прописанных в полетном задании, к действиям в условиях неопределенности», – рассказал собеседник «Газеты.Ru»
Был пилот и нет пилота
На форуме «Армия-2021» был представлен и другой крупный разработчик беспилотных систем в нашей стране – АО «Уральский завод гражданской авиации» (УЗГА). Там уже был создан БЛА тактического класса «Форпост-Р», а также создается перспективный комплекс с тяжелым высотным БЛА большой продолжительности полета «Альтиус».
«УЗГА на выставке обозначила стратегию формирования широкой линейки беспилотных летательных аппаратов, в том числе за счет создания беспилотных версий первоначально пилотируемых самолетов. Данный подход известен в мире и не единожды был использован целым рядом компаний-разработчиков», – рассказал «Газете.Ru» главный редактор журнала «Беспилотная авиация» Денис Федутинов.
К примеру, отметил специалист, израильской фирмой Aeronautics Defense Systems была создана беспилотная модификация легкого патрульного самолета DA-42 разработки австрийской Diamond Aircraft Industries, что открыло возможности более широкого использования аппарата в мониторинговых задачах в интересах военных и парамилитарных эксплуатантов.
Стоит отметить, что самолеты этой модели собираются и на мощностях УЗГА, что делает DA-42 одним из главных кандидатов на «обеспилочивание». Также в первых рядах в очереди на замещение пилота автоматикой стоят ЛМС 901 «Байкал» и УТС-800.
«Петербургское научно-производственное предприятие «Радар ммс» также показало несколько решений, относящихся к тематике беспилотных систем. В их числе собственный легкий БЛА вертолетного типа БВС ВТ 45, созданный сторонним разработчиком БЛА самолетного типа «Диам 20» с полезной нагрузкой «Радар ммс», а также мониторинговый комплекс – дронопорт – совместная разработка «Радар ммс» и стартапа HIVE», – рассказал Федутинов.
В легком классе БЛА, напомнил специалист, были представлены системы семейства «Элерон», разработанные компанией «Эникс» из Казани. Портативный комплекс разведки и наблюдения «Элерон 3СВ» уже давно закупаются российским Министерством обороны и активно эксплуатируются в войсках, включая применение в реальных боевых условиях в Сирии.
«Калашников» милитаризировал ZALA
В более крупной размерности БЛА на выставке был представлен аппарат «Орленок». Он создан казанской компанией «Аэрокон». «Орленок» представляет собой 30-килограммовый БЛА, который может выполнять полеты продолжительностью до 12 ч. Его отличительной особенностью является возможность одновременно нести целевую нагрузку разного назначения.
Разработанная ижевской компанией ZALA Aero широкая линейка беспилотных систем легкого класса и барражирующих боеприпасов была показана в павильоне концерна «Калашников», который является совладельцем фирмы. Долгое время изделия, разработанные компанией ZALA, находили широкое применение в гражданской сфере – они применялись в задачах мониторинга протяженных инфраструктурных объектов, таких как нефте- и газопроводы, высоковольтные линии электропередачи. Вхождение компании в состав группы компаний «Калашников» открыло перед ней также и перспективы использования в военной области.
Так, после проведения опытного применения в Сирии созданных компанией ZALA в инициативном порядке систем барражирующих боеприпасов «Ланцет», это направление заинтересовало российских военных. В ходе выставки «Армия-2021» стало известно, что Министерство обороны России согласовало тактико-технические требования к подобного рода системам, ранее отсутствовавшим в войсках.
Впрочем, взаимоотношения с подрядчиками и производителями БЛА требуют оптимизации.
«Колоссальное преимущество американской военной промышленности заключается в том, что при появлении того или иного заказа у них выстраивается очередь предприятий – кандидатов на поставку комплектующих и материалов. У нас же следующая ситуация: одно изделие – один поставщик. И это в лучшем случае. А поставщик еще и с претензиями и ненужными амбициями. У него нет большого желания заниматься партией из 20-50 деталей, которые необходимы, к примеру, для производства установочной партии БЛА. Поэтому у нас такие большие сроки реализации даже прекрасно задуманных проектов», – пояснил источник «Газеты.Ru» в оборонно-промышленном комплексе.
ОБНОВЛЕНИЕ: FDA предупреждает, что биотин может мешать лабораторным тестам: FDA Safety Communication
Дата выпуска: 5 ноября 2019 г.
Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) обновляет наше сообщение о безопасности за 2017 год, чтобы напомнить общественности, поставщикам медицинских услуг, лабораторному персоналу и разработчикам лабораторных тестов, что биотин, часто содержащийся в пищевых добавках, может значительно мешать определенным лабораторным тестам и вызывать неверные результаты, которые могут остаться незамеченными.FDA хочет информировать общественность и поставщиков медицинских услуг о вмешательстве биотина в лабораторные тесты, чтобы пациенты, врачи и лаборатории могли работать вместе, чтобы помочь предотвратить побочные эффекты.
Как отмечалось в исходном сообщении по безопасности, хотя биотин в образцах пациентов может вызывать ложно высокие или ложно низкие результаты, в зависимости от типа теста, FDA особенно обеспокоено вмешательством биотина, вызывающим ложно низкий результат для тропонина, клинически важного биомаркера. для помощи в диагностике сердечных приступов, которые могут привести к пропущенному диагнозу и потенциально серьезным клиническим последствиям.FDA продолжает получать отчеты о побочных эффектах, указывающие на то, что вмешательство биотина вызвало ложно низкие результаты по тропонину.
Со времени сообщения FDA по безопасности по этой теме в 2017 году некоторым разработчикам лабораторных тестов удалось снизить влияние биотина на свои анализы, но другие еще не обратились к нему. FDA по-прежнему обеспокоено лабораторными тестами на тропонин, которые не рассмотрели риск вмешательства биотина. FDA опубликовало веб-страницу «Вмешательство биотина в лабораторные тесты на тропонин — анализы, подверженные влиянию биотина», чтобы уведомить общественность об анализах тропонина, в которых риск вмешательства биотина еще не изучен.
Рекомендации для потребителей
- Поговорите со своим врачом, если вы в настоящее время принимаете биотин (также называемый витамином B7) или рассматриваете возможность добавления биотина или добавки, содержащей биотин, в свой рацион.
- Знайте, что биотин содержится в поливитаминах, включая пренатальные поливитамины, биотиновые добавки и добавки для роста волос, кожи и ногтей в количествах, которые могут помешать лабораторным тестам. Однако количество биотина может значительно различаться в разных продуктах.Учтите, что рекомендуемая суточная норма биотина составляет 0,03 мг, и это количество обычно не мешает лабораторным тестам.
- Имейте в виду, что некоторые добавки, особенно те, которые предназначены для ухода за волосами, кожей и ногтями, могут иметь высокий уровень биотина, что не всегда может быть ясно из названия добавки. FDA известно о многих добавках, содержащих 20 мг биотина, а в некоторых — до 100 мг на таблетку, с рекомендациями принимать несколько таблеток в день. Добавки, содержащие высокий уровень биотина, могут помешать лабораторным тестам.
- Недостаточно информации, чтобы знать, предотвратит ли прекращение потребления биотина на любое количество часов до тестирования получение неверных результатов.
- Если вам сделали лабораторный анализ и вы обеспокоены его результатами, поговорите со своим врачом о возможности воздействия биотина.
- Для получения дополнительной информации см. Информационный бюллетень NIH по биотину для потребителей
Рекомендации для медицинских работников
- Поговорите со своими пациентами о любых добавках биотина или поливитаминах, которые они принимают, которые могут содержать биотин, включая добавки, предназначенные для роста волос, кожи и ногтей.
- Знайте, что биотин содержится в поливитаминах, включая пренатальные поливитамины, биотиновые добавки и пищевые добавки для роста волос, кожи и ногтей в количествах, которые могут помешать лабораторным тестам.
- Имейте в виду, что многие лабораторные тесты, включая, помимо прочего, диагностические тесты сердечно-сосудистой системы и гормональные тесты, в которых используется технология биотина, потенциально могут быть затронуты, и если в образце пациента есть биотин, могут быть получены неверные результаты теста.
- Сообщите в лабораторию, проводящую тестирование, если ваш пациент принимает биотин.
- Если результат лабораторного теста не соответствует клинической картине вашего пациента, рассматривайте вмешательство биотина как возможный источник ошибки.
- Сообщите производителю лабораторных тестов и FDA, если вам стало известно о нежелательном явлении у пациента из-за потенциально неверных результатов лабораторных тестов из-за интерференции биотина.
Рекомендации для персонала лаборатории
- Если вы используете анализы с биотиновой технологией, имейте в виду, что трудно идентифицировать образцы, содержащие биотин; поэтому важно общаться с поставщиками медицинских услуг и пациентами, чтобы предотвратить получение неверных результатов анализов.
- Если вы собираете образцы в лаборатории, спросите, принимает ли пациент биотин или биотинсодержащую добавку.
- Расскажите поставщикам медицинских услуг о влиянии биотина на определенные лабораторные тесты, используемые в вашей лаборатории.
- Учтите, что рекомендуемая суточная норма биотина для взрослых составляет 0,03 мг, и эти уровни биотина обычно не вызывают значительных помех. Однако добавки, содержащие высокий уровень биотина, в том числе те, которые продаются для ухода за волосами, кожей и ногтями, могут содержать до 20 мг биотина, и врачи могут рекомендовать до 300 мг в день при таких состояниях, как рассеянный склероз.Уровни биотина выше рекомендованной суточной нормы могут существенно повлиять на результаты лабораторных анализов.
- Имейте в виду, что образцы, взятые у пациентов, принимающих высокие уровни биотина, могут содержать более 100 нг / мл биотина. Концентрации биотина до 1200 нг / мл могут присутствовать в образцах, взятых у пациентов, принимающих до 300 мг в день.
- В настоящее время доступных данных недостаточно для поддержки рекомендаций по безопасному тестированию с использованием затронутых тестов у пациентов, принимающих высокие уровни биотина, в том числе о продолжительности времени для выведения биотина из крови.
- Свяжитесь с производителем лабораторных тестов, если у вас есть вопросы о влиянии биотина.
- Имейте в виду некоторые анализы тропонина, в которых риск интерференции биотина еще не изучен. См. Взаимодействие биотина с лабораторными тестами на тропонин — Анализы, подверженные влиянию биотина.
Рекомендации для производителей и разработчиков лабораторных тестов
- Если в вашем анализе используется технология биотина, свяжитесь с FDA, чтобы обсудить влияние биотина.
- Изучите влияние биотина (как минимум до 1200 нг / мл биотина) в ваших анализах, в которых используется технология биотина.Определите самую низкую концентрацию биотина, которая может вызвать клинически значимое влияние на результаты ваших тестов.
- Сообщите своим клиентам, если они могут не знать, что в вашем тесте используется технология биотина, и как на это может повлиять.
- Свяжитесь с FDA, если у вас есть какие-либо вопросы о биотиновой технологии и вмешательстве.
Вмешательство биотина в некоторые лабораторные тесты может привести к неверным результатам
Во многих лабораторных тестах используется технология биотина из-за его способности связываться с определенными белками, которые можно измерить для выявления определенных состояний здоровья.Например, биотин используется в тестах на гормоны и на маркеры здоровья сердца, такие как тропонин. Биотин, также известный как витамин B7, представляет собой водорастворимый витамин, который часто содержится в мультивитаминах, витаминах для беременных и пищевых добавках, предназначенных для роста волос, кожи и ногтей.
Биотин в крови или других образцах, взятых у пациентов, принимающих высокие уровни биотина в составе пищевых добавок, может вызвать клинически значимые неверные результаты лабораторных анализов. FDA продолжает получать сообщения о побочных эффектах, в дополнение к одной смерти, о которой сообщалось до сообщения о безопасности в 2017 году, связанных с вмешательством биотина в лабораторные тесты.
Неправильные результаты теста могут привести к неправильному ведению пациента или неправильному диагнозу. Например, ложно низкий результат для тропонина, клинически важного биомаркера, помогающего в диагностике сердечных приступов, может привести к пропущенному диагнозу и потенциально серьезным клиническим последствиям. До сообщения о безопасности в 2017 году FDA получило отчет о том, что один пациент, принимавший высокие уровни биотина, умер после результатов теста на низкий уровень тропонина, когда использовался тест на тропонин, подверженный влиянию биотина.
FDA известно о людях, принимающих высокие уровни биотина, которые могут помешать лабораторным тестам. Многие диетические добавки, предназначенные для ухода за волосами, кожей и ногтями, содержат уровни биотина в 650 раз превышающие рекомендуемую суточную дозу биотина. Врачи также могут рекомендовать высокие уровни биотина пациентам с определенными заболеваниями, такими как рассеянный склероз (РС). Уровни биотина выше рекомендованной суточной нормы могут помешать лабораторным тестам.
Пациенты и врачи могут не знать о влиянии биотина на лабораторные анализы.Даже врачи, которым известно об этом вмешательстве, скорее всего, не знают, принимают ли пациенты биотин и в каком количестве. Поскольку пациенты не знают о влиянии биотина, пациенты могут не сообщать о приеме биотиновых добавок своим врачам и могут даже не знать, что они принимают биотин (например, при приеме продуктов, обычно маркированных как полезные для волос и ногтей).
Действия FDA
28 ноября 2017 года FDA выпустило сообщение по безопасности, FDA предупреждает, что биотин может мешать лабораторным тестам, в котором обсуждались проблемы, связанные с вмешательством биотина в некоторые лабораторные тесты.
5 ноября 2019 года FDA опубликовало это обновленное сообщение по безопасности, потому что FDA по-прежнему обеспокоено некоторыми лабораторными тестами, которые не учитывают риск вмешательства биотина.
Кроме того, FDA также опубликовало веб-страницу «Взаимодействие биотина с лабораторными тестами на тропонин — анализы, подверженные влиянию биотина», чтобы уведомить общественность об анализах тропонина, в которых риск влияния биотина еще не изучен.
FDA продолжает отслеживать отчеты о побочных эффектах, связанных с вмешательством биотина в лабораторные тесты, и будет обновлять общественность, если появится новая важная информация.
Сообщение о проблемах в FDA
Если вы подозреваете или испытываете проблему с лабораторным тестом во время приема биотина, FDA рекомендует вам сообщить о проблеме через форму добровольного сообщения MedWatch.
Медицинский персонал, нанятый учреждениями, которые подпадают под требования FDA к отчетности учреждений, должен следовать процедурам отчетности, установленным их учреждениями.
Вопросы
Если у вас есть вопросы, отправьте электронное письмо в Отдел промышленности и обучения потребителей (DICE) по адресу DICE @ FDA.HHS.GOV или позвоните по телефону 800-638-2041 или 301-796-7100.
Сахароза препятствует гомеостазу эндогенных цитокининов и экспрессии связанных с органогенезом генов во время органогенеза de novo побегов кольраби
Мазид М., Хан, Т. А. и Мохаммад Ф. Цитокинины, классический многогранный гормон в системе растений. J. Stress Physiol. Biochem. 7 , 347–368 (2011).
Google ученый
Ван Г., Чжан Г. и Ву М. Передача сигналов пептида CLE и взаимодействие с фитогормонами и внешними стимулами. Фронт. Plant Sci. 6 , 1211 (2016).
PubMed PubMed Central Google ученый
Кибер, Дж. Дж. И Шаллер, Г. Передача сигналов цитокининов в развитии растений. Разработка 145 , разработчик 9344 (2018).
Клемш и др. . Изменения уровней цитокининов и метаболизма в эксплантатах табака ( Nicotiana tabacum L.) во время органогенеза in vitro побегов, индуцированного транс -зеатином и дигидрозеатином. Регулятор роста растений . 65 , 427–437 (2011).
Каминек, М., Мотыка, В. и Ванькова, Р. Регулирование содержания цитокининов в растительных клетках. Physiol. Растение. 101 , 689–700 (1997).
Артикул Google ученый
osić, T. et al. Органогенез побегов in vitro и сравнительный анализ эндогенных фитогормонов кольраби ( Brassica oleracea var. Gongylodes): влияние генотипа, типа эксплантата и применяемых цитокининов. Растительная клеточная ткань. Культ органа. 121 , 741–760 (2015).
Артикул CAS Google ученый
Jones, B. et al. Цитокининовая регуляция синтеза ауксина в Arabidopsis включает гомеостатическую петлю обратной связи, регулируемую посредством передачи сигналов ауксина и цитокинина. Растительная клетка 22 , 2956–2969 (2010).
CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый
Cheng, Z. J. et al. Паттерн ауксиновых и цитокининовых ответов на индукцию меристемы побегов является результатом регуляции биосинтеза цитокининов с помощью AUXIN RESPONSE FACTOR3. Plant Physiol. 161 , 240–251 (2013).
CAS PubMed Статья Google ученый
Мотте, Х., Вереке, Д., Гилен, Д. и Вербрук, С. Молекулярный путь к регенерации in vitro побегов in vitro. Biotechnol. Adv. 32 , 107–121 (2014).
CAS PubMed Статья Google ученый
Ли, Д. Дж. et al. Полногеномный профиль экспрессии РЕГУЛЯТОРА ОТВЕТА АРАБИДОПСИСА 7 (ARR7) сверхэкспрессии цитокининового ответа. Мол. Genet. Геномика 277 , 115–137 (2007).
CAS PubMed Статья Google ученый
Рашотт А. М., Карсон С. Д. Б., То, Дж. П. С. и Кибер, Дж. Дж. Профилирование экспрессии действия цитокининов у Arabidopsis. Plant Physiol. 132 , 1998–2011 (2003).
CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый
osić, et al. Профили экспрессии генов, связанных с органогенезом, в течение одностадийного органогенеза de novo побегов из интактных проростков кольраби. J. Plant Physiol. 232 , 257–269 (2019).
PubMed Статья CAS Google ученый
Tamaki, H. et al. Идентификация новых факторов меристемы, участвующих в регенерации побегов, посредством анализа чувствительных к температуре мутантов Arabidopsis. Плант Дж. 57 , 1027–1039 (2009).
CAS PubMed Статья Google ученый
Riou-Khamlichi, C., Huntley, R., Jacqmard, A. & Murray, J.A.H. Активация цитокинином деления клеток Arabidopsis посредством циклина D-типа. Наука 283 , 1541–1544 (1999).
ADS CAS PubMed Статья Google ученый
Rosa, Y. B.C.J., Aizza, L.C.B., Armanhi, J. S. L. & Dornelas, M. C. Гомолог Passiflora гена циклина D-типа дифференциально экспрессируется в ответ на сахарозу, ауксин и цитокинин. Растительная клеточная ткань. Культ органа. 115 , 233–242 (2013).
CAS Статья Google ученый
Planchais, S. et al. Росковитин, новый ингибитор циклинзависимой киназы, характеризует точку рестрикции и переход G2 / M в суспензии клеток табака BY-2. Plant J. 12 , 191–202 (1997).
CAS PubMed Статья Google ученый
Laureys, F. et al. Зеатин незаменим для перехода G2 – M в клетках BY – 2 табака. FEBS Lett. 426 , 29–32 (1998).
CAS PubMed Статья Google ученый
Zhang, K., Diederich, L., John, P.C.L. Потребность в цитокинине для деления клеток в культивируемых клетках Nicotiana plumbaginifolia может быть удовлетворена с помощью дрожжевой протеинтирозинфосфатазы Cdc25. Значение механизмов цитокининового ответа и развития растений. Plant Physiol. 137 , 308–316 (2005).
CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый
Леон, П. и Шин, Дж. Соединения сахара и гормонов. Trends Plant Sci. 8 , 1360–1385 (2003).
Артикул CAS Google ученый
Гибсон, С. И. Пути ответа на сахар и фитогормоны: навигация по сигнальной сети. J. Exp. Бот. 55 , 253–264 (2004).
CAS PubMed Статья Google ученый
Skylar, A., Sung, F., Hong, F., Chory, J. & Wu, X. Метаболический сахарный сигнал способствует меристематической пролиферации Arabidopsis через G2. Dev. Биол. 351 , 82–89 (2011).
CAS PubMed Статья Google ученый
Кох, К. Е. Углеводно-модулированная экспрессия генов в растениях. Annu. Rev. Plant Physiol. Завод Мол. Биол. 47 , 509–540 (1996).
CAS PubMed Статья Google ученый
Kushwah, S. & Laxmi, A. Взаимодействие между передачей сигналов глюкозы и цитокининов в контроле роста и развития корней проростков Arabidopsis thaliana . Завод Сигнал. Behav. 12 , e1312241. https://doi.org/10.1080/155.2017.1312241 (2017).
CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый
Sakr, S. et al. Центр передачи сигналов сахара: Обзор регуляторов и взаимодействия с гормональной и метаболической сетью. Внутр. J. Mol. Sci. 19 , 2506 (2018).
PubMed Central Статья CAS PubMed Google ученый
Smeekens, S. & Rook, F. Чувствительность к сахару и опосредованная сахаром передача сигнала в растениях. Plant Physiol. 115 , 7–13 (1997).
CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый
Джефферсон Р., Голдсбро А. и Беван М. Регуляция транскрипции гена пататина-1 в картофеле. Plant Mol. Биол. 14 , 995–1006 (1990).
CAS PubMed Статья Google ученый
Yokoyama, R. et al. Промотор rolC плазмиды Agrobacterium rhizogenes Ri активируется сахарозой в трансгенных растениях табака. Мол. Genet Genet. 244 , 15–22 (1994).
CAS PubMed Статья Google ученый
Lu, C.-A., Ho, T.-D., Ho, S.-L. & Ю, С.-М. Три новых белка MYB с одним повторением связывания ДНК опосредуют сахарную и гормональную регуляцию экспрессии гена α-амилазы. Растительная клетка 14 , 1963–1980 (2002).
CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый
Cheng, W.-H. et al. Уникальная короткоцепочечная дегидрогеназа / редуктаза в биосинтезе абсцизовой кислоты Arabidopsis и передаче сигналов глюкозы. Растительная клетка 14 , 2723–2743 (2002).
CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый
Riou-Khamlichi, C., Menges, M., Healy, J. M. S. & Murray, J. A. H. Контроль сахара в клеточном цикле растений: Дифференциальная регуляция экспрессии гена циклина D-типа арабидопсиса. Мол. Клетка. Биол. 20 , 4513–4521 (2000).
CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый
Сами Ф., Юсуф М., Файзан М., Фараз А. и Хаят С. Роль сахаров в условиях абиотического стресса. Plant Physiol. Biochem. 109 , 54–61 (2016).
CAS PubMed Статья Google ученый
Moore, B. et al. Роль датчика глюкозы HXK1 Arabidopsis в передаче сигналов питательных веществ, света и гормонов. Наука 300 , 332–336 (2003).
ADS CAS PubMed Статья Google ученый
Хартиг, К. и Бек, Э. Перекрестные помехи между ауксином, цитокининами и сахарами в клеточном цикле растений. Plant Biol. 8 , 389–396 (2006).
CAS PubMed Статья Google ученый
Ли, С.-Т. И Хуанг, W.-L. Цитокинин, ауксин и абсцизовая кислота влияют на метаболизм сахарозы, способствуя органогенезу de novo побегов каллюса риса ( Oryza sativa L.). Бот. Стю. 54 , 5 (2013).
Артикул CAS Google ученый
Икеда, Ю., Коидзуми, Н., Кусано, Т. и Сано, Х. Сахарозная и цитокининовая модуляция WPK4, гена, кодирующего протеинкиназу, родственную SNF1, из пшеницы. Plant Physiol. 121 , 813–820 (1999).
CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый
Kushwah, S. & Laxmi, A. Взаимодействие между глюкозой и путем передачи сигнала цитокинина в Arabidopsis thaliana . Plant Cell Environ. 37 , 235–253 (2014).
CAS PubMed Статья Google ученый
Barbier, F. et al. Сахароза является ранним модулятором ключевых гормональных механизмов, контролирующих рост почек у Rosa hybrida . J. Exp. Бот. 66 , 2569–2582 (2015).
CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый
osić, et al. Регенерация растений in vitro из незрелых зиготических зародышей и повторяющийся соматический эмбриогенез у кольраби ( Brassica oleracea var. гонгилоды ). Vitro Cell. Dev. Биол. Завод 49 , 294–303 (2013).
Артикул Google ученый
osić, T. et al. Влияние различных типов сахаров и регуляторов роста растений на рост и развитие проростков кольраби in vitro . Arch. Биол. Sci. 72 , 349–357 (2020).
Артикул Google ученый
Kamínek, M. et al. Пуриновые цитокинины: предложение сокращений. Регул роста растений. 32 , 253–256 (2000).
Артикул Google ученый
Aremu, A.O. et al. Как экзогенно применяемый тип цитокининов влияет на рост и эндогенные цитокинины у микроразмножающихся Merwilla plumbea ?. Растительная клеточная ткань. Культ органа. 118 , 245–256 (2014).
CAS Статья Google ученый
Гибсон, С. I. Контроль развития растений и экспрессии генов с помощью передачи сигналов сахара. Curr. Opin. Plant Biol. 8 , 93–102 (2005).
CAS PubMed Статья Google ученый
Ясин, М., Ахмад, Т., Саблок, Г., Стандарди, А. и Хафиз, И. А. Обзор: роль источников углерода для роста и развития растений in vitro . Мол. Биол. Отчет 40 , 2837–2849 (2013).
CAS PubMed Статья Google ученый
Борисюк Л. и др. Энергетический статус и его контроль на эмбриогенез бобовых: распределение АТФ в эмбрионах Vicia faba регулируется в процессе развития и коррелирует с фотосинтетической способностью. Plant J. 36 , 318–329 (2003).
CAS PubMed Статья Google ученый
Desjardins, Y., Hdider, C. & de Riek, J. Углеродное питание in vitro — регулирование и манипулирование ассимиляцией углерода в системах микроразмножения в Автоматизация и контроль окружающей среды в культуре тканей растений (ред. Aitken – Christie, J., Kozai, T. и Smith, ML) 441–471 (Springer Nature, Швейцария, 1995).
Gabryszewska, E. Влияние глюкозы и регуляторов роста на органогенез Paeonia lactiflora Pall.in vitro. J. Fruit Ornam. Plant Res. 18 , 309–320 (2010).
CAS Google ученый
Dekkers, B.J.W. И Смикенс, С. Регулирование прорастания и перехода к росту проростков сахаром и абсцизовой кислотой в Развитие семян, покой и прорастание (ред. Брэдфорд, К. и Ноногаки, Х.) 305–327 (Blackwell Publishing, Оксфорд, Великобритания, 2007).
Чжоу, Л., Янг, Дж.C., Jones, T. L. и Sheen, J. Перекрестные помехи при трансдукции сигналов глюкозы и этилена, выявленные нечувствительным к глюкозе мутантом Arabidopsis. PNAS 95 , 10294–10299 (1998).
ADS CAS PubMed Статья Google ученый
Гибсон, С. И., Лаби, Р. Дж. И Ким, Д. Нечувствительный к сахару1 ( sis1 ) мутант Arabidopsis является аллельным к ctr1 . Biochem.Биофиз. Res. Commun. 280 , 196–203 (2001).
CAS PubMed Статья Google ученый
Lu, B. et al. Избыточная экспрессия транспортера сахара тонопласта дыни CmTST1 улучшала рост корней при высоком содержании сахара. Внутр. J. Mol. Sci. 21 , 3524 (2020).
CAS PubMed Central Статья PubMed Google ученый
Джордж, Э. Ф. Размножение растений культурой ткани в части 1: технология, 1–574 (Exegetics Ltd., 1993).
Google ученый
Ван, Х.-Л., Ли, П.-Д., Лю, Л.-Ф. И Су, Ж.-К. Влияние осмотического стресса, вызванного сорбитолом, на изменения пулов углеводов и свободных аминокислот в суспензионных культурах клеток сладкого картофеля. Бот. Бык. Акад. Sinica 40 , 219–225 (1999).
CAS Google ученый
Biahoua, A. & Bonneau, L. Контроль in vitro соматического эмбриогенеза веретенообразного дерева ( Euonymus europaeus L.) по типу сахара и осмотическому потенциалу культуральной среды. Plant Cell Rep. 19 , 185–190 (1999).
CAS PubMed Статья Google ученый
Lapenã, L., Pérez-Bermúdez, P. & Segura, J. Морфогенез в культурах гипокотилей Digitalis obscura : влияние уровней и источников углеводов. Plant Sci. 57 , 247–252 (1988).
Артикул Google ученый
Рогнони С., Тенг С., Арру Л., Смикенс С. и Перата П. Влияние сахара на раннее развитие проростков Arabidopsis. Регул роста растений. 52 , 217–228 (2007).
CAS Статья Google ученый
Гуо, Б., Аббаси, Б.Х., Зеб, А., Сю, Л. Л. и Вей, Ю. Х. Тидиазурон: многомерный регулятор роста растений. Afr. J. Biotechnol. 10 , 8984–9000 (2011).
CAS Статья Google ученый
Девир, Ю. Х., Нурмансьях, Н. Ю. и Тейшейра да Силва, Дж. А. Тидиазурон-индуцированные аномалии в культурах тканей растений. Plant Cell Rep. 37 , 1451–1470 (2018).
CAS PubMed Статья Google ученый
Zhang, C.G. et al. Эндогенные гормональные уровни в каллусах Scutellaria baicalensis , индуцированные тидиазуроном. Русс. J. Plant Physiol. 52 , 345–351 (2005).
CAS Статья Google ученый
Shirani, S., Mahdavi, F. & Maziah, M. Морфологическая аномалия среди регенерированных побегов банана и подорожника ( Musa, spp.) После размножения in vitro с TDZ и BAP из отрезанных верхушек побегов. Afr. J. Biotechnol. 8 , 5755–5761 (2010).
Google ученый
Ван, С. Ю., Цзяо, Х. Дж. И Фауст, М. Изменения активности метаболических ферментов во время индуцированного ТДЗ распускания почек яблони. Hort. Sci. 26 , 171–173 (1991).
CAS Google ученый
Cuesta, C. et al. Профили эндогенных цитокининов и их связь с межсемейными различиями во время придаточного каулогенеза в семядолях Pinus pinea . J. Plant Physiol. 169 , 1830–1837 (2012).
CAS PubMed Статья Google ученый
Montalbán, IA, Novák, O., Rolčik, J., Strnad, M. & Moncaleán, P. Профили эндогенных цитокининов и ауксинов во время in vitro органогенеза из вегетативных почек Pinus radiata взрослых деревьев . Physiol. Растение. 148 , 214–231 (2013).
PubMed Статья CAS Google ученый
Raspor, M. et al. Профили цитокининов растений картофеля, гиперэкспрессирующих AtCKX2 , и влияние измененного гомеостаза цитокининов на клубнеобразование in vitro . J. Регулятор роста растений. 31 , 460–470 (2012).
CAS Статья Google ученый
Гуджар, Р. С. и Супайбулватана, К. Режим функций цитокининов, помогающих адаптации растений к осмотическим стрессам. Растения 8 , 542 (2019).
CAS PubMed Central Статья PubMed Google ученый
Arrom, L. & Munné-Bosch, S. Гормональные изменения во время развития цветков в тканях цветков Lilium. Planta 236 , 343–354 (2012).
CAS PubMed Статья Google ученый
Сайранен, И. et al. Растворимые углеводы регулируют биосинтез ауксина через белки PIF у Arabidopsis. Растительная клетка 24 , 4907–4916 (2012).
CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый
Gordon, S. P. et al. Формирование паттерна во время сборки de novo меристемы побегов Arabidopsis . Разработка 134 , 3539–3548 (2007).
CAS PubMed Статья Google ученый
Huang, W. L., Lee, C. H. и Chen, Y. R. Уровни эндогенной абсцизовой кислоты и индол-3-уксусной кислоты влияют на органогенез побегов в каллусных культурах риса, подвергнутых осмотическому стрессу. Растительная клеточная ткань. Культ органа. 108 , 257–263 (2012).
CAS Статья Google ученый
Такей К., Сакакибара Х. и Сугияма Т. Идентификация генов, кодирующих аденилатизопентенилтрансферазу, фермент биосинтеза цитокининов, Arabidopsis thaliana . J. Biol. Chem. 276 , 26405–26410 (2001).
CAS PubMed Статья Google ученый
Ванкова Р., Гаудинова А., Каминек, М. и Эдер, Дж. Влияние взаимодействия синтетического цитокинина и ауксина на производство природных цитокининов иммобилизованными клетками табака в Физиология и биохимия цитокининов в растениях (ред.Каминек, М., Мок, D.W.S. & Zazímalová, E.) 47–51 (Академическое издательство SPB, Гаага, Нидерланды, 1992).
Nisler, J. et al. Новые ингибиторы цитокининоксидазы / дегидрогеназы на основе тидиазурона. Plant Mol. Биол. 92 , 235–248 (2016).
CAS PubMed Статья Google ученый
Романов, Г. А., Ломин, С. Н. и Шмюллинг, Т. Передача сигналов цитокинина: из ER или из PM? Вот в чем вопрос!. New Phytol. 218 , 41–53 (2018).
PubMed Статья Google ученый
Марч, С. Дж., Виктор, Дж. М. Р., Кришнарадж, С. и Саксена, П. К. Роль пролина в индуцированном тидиазуроном соматическом эмбриогенезе арахиса. Vitro Cell Dev. Биол. 35 , 102–105 (1999).
CAS Статья Google ученый
Тревавас, А.Дж. Важность индивидуальности в Реакциях растений на стрессы окружающей среды (ред. Лернер, Х.Р.) 27–43 (Марсель Деккер, Нью-Йорк, 1999).
Kiba, T., Takebayashi, Y., Kojima, M. & Hitoshi Sakakibara, H. Индуцированный сахаром биосинтез цитокинина de novo , индуцированный сахаром, способствует росту Arabidopsis при повышенном CO 2 . Sci. Отчетность 9 , 7765 (2019).
ADS PubMed PubMed Central Статья CAS Google ученый
Stokes, M. E., Chattopadhyay, A., Wilkins, O., Nambara, E. & Campbell, M. M. Взаимодействие между сахарозой и фолатом модулирует передачу сигналов ауксина в Arabidopsis. Plant Physiol. 162 , 1552–1565 (2013).
CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый
Takei, K. et al. AtIPT3 является ключевым фактором, определяющим нитрат-зависимый биосинтез цитокининов у Arabidopsis. Physiol растительных клеток. 45 , 1053–1062 (2004).
CAS PubMed Статья Google ученый
Ohkama, N. et al. Регуляция экспрессии чувствительных к сере генов экзогенно применяемыми цитокининами в Arabidopsis thaliana . Physiol растительных клеток. 43 , 1493–1501 (2002).
CAS PubMed Статья Google ученый
Woo, J. et al. Ответ и восстановление транскриптома Arabidopsis thaliana на фосфатное голодание. BMC Plant Biol. 12 , 62. https://doi.org/10.1186/1471-2229-12-62 (2012).
CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый
Кушва, С., Джонс, А. М. и Лакшми, А. Взаимодействие цитокининов с передачей сигналов этилена, ауксина и глюкозы контролирует направленный рост корней проростков арабидопсиса. Plant Physiol. 156 , 1851–1866 (2011).
CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый
Hwang, I. & Sheen, J. Двухкомпонентная схема в передаче сигнала цитокинина Arabidopsis. Nature 413 , 383–389 (2001).
ADS CAS PubMed Статья Google ученый
Кэри А. Дж., Че П. и Хауэлл С. Х. События развития и паттерны экспрессии генов апикальной меристемы побегов во время развития побегов Arabidopsis thaliana . Плант Дж. 32 , 867–877 (2002).
CAS PubMed Статья Google ученый
Leibfried, A. et al. WUSCHEL контролирует функцию меристемы путем прямой регуляции цитокинин-индуцируемых регуляторов ответа. Nature 438 , 1172–1175 (2005).
ADS CAS PubMed Статья Google ученый
Murashige, T. & Skoog, F. Пересмотренная среда для быстрого роста и биологических анализов с культурами тканей табака. Physiol. Растение. 15 , 473–497 (1962).
CAS Статья Google ученый
Линсмайер, Э.М. и Скуг, Ф. Требования культур тканей табака к органическому фактору роста. Physiol. Растение. 18 , 100–127 (1965).
CAS Статья Google ученый
Добрев П. И. и Ванкова Р. Количественная оценка содержания абсцизовой кислоты, цитокинина и ауксина в тканях растений, подвергшихся солевому стрессу. Methods Mol. Биол. 913 , 251–261 (2012).
CAS PubMed Google ученый
Джилианов Д.Л. и др. Динамика эндогенных фитогормонов при обезвоживании и восстановлении видов воскресающих растений Haberlea rhodopensis . J. Регулятор роста растений. 32 , 564–574 (2013).
CAS Статья Google ученый
Гасич К., Эрнандес А. и Корбан С. С. Экстракция РНК из различных тканей яблока, богатых полифенолами и полисахаридами, для создания библиотеки кДНК. Plant Mol. Биол. Реп. 22 , 437a – 437g (2004).
Артикул Google ученый
Передовые врачи выступают против законодательства Техаса, которое вмешивается или криминализирует репродуктивную помощь пациентам
Вашингтон, округ Колумбия, 2 сентября 2021 г. — Ведущие группы врачей Америки глубоко обеспокоены последствиями вступившего в силу вчера закона штата Техас, запрещающего аборты, медицинские консультации и поддержку в связи с абортом после шести недель беременности.
Наши организации, которые представляют почти 600 000 врачей и студентов-медиков, категорически выступают против любых законов и постановлений, которые вмешиваются в конфиденциальные отношения между пациентом и его врачом. Этот новый закон поставит под угрозу пациентов и врачей, поставив под угрозу врачей, оказывающих необходимую медицинскую помощь или даже предлагающих основанную на фактах информацию, поскольку частные граждане могут вмешиваться в процесс принятия решений в отношении репродуктивного здоровья женщин. Более того, этот закон фактически лишает женщин доступа к доказательной комплексной помощи и информации и лишает женщин права принимать решения в отношении своего собственного здоровья.
Наши организации категорически против любой политики, которая ограничивает научно обоснованную медицинскую практику, ставит под угрозу отношения пациента и врача и препятствует оказанию безопасной, своевременной и необходимой комплексной помощи, включая услуги и информацию в области репродуктивного здоровья.
Пациенты должны иметь возможность полагаться на своих врачей, помогающих им принимать важные решения относительно их личного здоровья, включая репродуктивное здоровье. С этой целью мы принципиально выступаем против беспрецедентной возможности частных лиц подавать иски против лиц, которые помогают женщине сделать аборт, в том числе врачей, обеспечивающих своим пациентам необходимую, основанную на доказательствах помощь.Врачи должны иметь возможность практиковать медицину, основываясь на их годах медицинского образования, подготовки, опыта и имеющихся доказательств, свободно и без угрозы наказания, преследований или возмездия.
Пациенты и их врачи должны принимать совместные медицинские решения о том, какой уход лучше для них. Мы настоятельно призываем Верховный суд США незамедлительно запретить этот закон и любые аналогичные законы.
Американская психиатрическая ассоциация
Американская психиатрическая ассоциация, основанная в 1844 году, является старейшей медицинской ассоциацией в стране.APA также является крупнейшей психиатрической ассоциацией в мире, в которую входят более 37 400 врачей, специализирующихся на диагностике, лечении, профилактике и исследовании психических заболеваний. Видение APA — обеспечить доступ к качественной психиатрической диагностике и лечению. Для получения дополнительной информации посетите www.psychiatry.org.
Об Американской академии семейных врачей
Основанная в 1947 году, AAFP представляет 133 500 врачей и студентов-медиков по всей стране.Это крупнейшее медицинское общество, занимающееся исключительно первичной медико-санитарной помощью. Семейные врачи проводят примерно одно из пяти визитов к врачу — это 192 миллиона посещений ежегодно, что на 48 процентов больше, чем у следующей по посещаемости медицинской специальности. Сегодня семейные врачи оказывают больше помощи малообеспеченным и сельским жителям Америки, чем врачи любой другой медицинской специальности. Краеугольным камнем семейной медицины являются постоянные личные отношения пациента и врача, ориентированные на комплексную помощь. Чтобы узнать больше о специализации семейной медицины, позиции AAFP по вопросам и клинической помощи, а также для загружаемых мультимедийных материалов, посвященных семейной медицине, посетите веб-сайт www.aafp.org/media. Для получения информации о здоровье, состоянии здоровья и благополучии посетите отмеченный наградами веб-сайт AAFP для потребителей www.familydoctor.org ..
Об Американской академии педиатрии
Американская академия педиатрии — это организация, в которую входят 67 000 педиатров первичной медико-санитарной помощи, педиатрических медицинских узких специалистов и педиатрических хирургических специалистов, занимающихся вопросами здоровья, безопасности и благополучия младенцев, детей, подростков и молодых людей.Для получения дополнительной информации посетите www.aap.org и подпишитесь на нас в Twitter @AmerAcadPeds.
Об Американском колледже врачей
Американский колледж врачей — крупнейшая специализированная медицинская организация в США, членами которой являются более чем 145 стран мира. В состав ACP входят 163 000 терапевтов (терапевтов), смежных специалистов и студентов-медиков. Врачи-терапевты — это специалисты, которые применяют научные знания и клинический опыт для диагностики, лечения и заботливого ухода за взрослыми по всему спектру — от здоровья до сложных заболеваний.Следите за ACP в Twitter, Facebook и Instagram.
Об Американском колледже акушеров и гинекологов
Американский колледж акушеров и гинекологов (ACOG) является ведущей в стране группой врачей, оказывающих медицинскую помощь женщинам. Как частная, добровольная, некоммерческая организация, состоящая из 60 000 членов, ACOG решительно выступает за качественное медицинское обслуживание женщин, поддерживает самые высокие стандарты клинической практики и непрерывного образования своих членов, способствует просвещению пациентов и повышает осведомленность своих членов и общественности. об изменении проблем, стоящих перед женским здоровьем.www.acog.org.
Об Американской остеопатической ассоциации
Американская остеопатическая ассоциация (AOA) представляет более 151 000 врачей-остеопатов (DO) и студентов-остеопатов; способствует общественному здоровью; поощряет научные исследования; выступает в качестве основного сертифицирующего органа для ДО; и является аккредитационным агентством для остеопатических медицинских школ. Чтобы узнать больше о доктринах и остеопатической философии медицины, посетите сайт www.osteopathic.org.
врачей первой линии выступают против законодательства, которое вмешивается или криминализирует уход за пациентами
Вашингтон, Д.C. (2 апреля 2021 г.) — Законодательные собрания нескольких штатов по всей стране недавно внесли или обсуждают законопроекты, которые ограничат оказание услуг по подтверждению гендерного равенства пациентам, различающимся по полу, особенно детям и подросткам.
Наши организации, которые представляют почти 600 000 врачей и студентов-медиков, выступают против любых законов и постановлений, которые дискриминируют трансгендеров и лиц различного пола или вмешиваются в конфиденциальные отношения между пациентом и его врачом.Эта конфиденциальность имеет решающее значение для того, чтобы пациенты могли доверять врачам при правильном консультировании, диагностике и лечении.
Наши организации категорически против любых законов или постановлений, которые могут помешать оказанию доказательной медицинской помощи любому пациенту, подтверждая нашу приверженность обеспечению безопасности пациентов. Мы признаем здоровье одним из основных прав человека для каждого человека, независимо от его гендерной идентичности или сексуальной ориентации. Для лиц, различающихся по полу, включая детей и подростков, это означает доступ к уходу с учетом гендерного фактора, который является частью комплексной первичной медико-санитарной помощи.
Кроме того, мы категорически против любых попыток криминализировать или наказывать врачей за оказание необходимой помощи своим пациентам. Врачи должны иметь возможность практиковать медицину, основываясь на их годах медицинского образования, подготовки, опыта и имеющихся данных, свободно и без угрозы наказания. Пациенты и их врачи, а не лица, определяющие политику, должны вместе принимать решения о том, какое лечение лучше для них.
Американская психиатрическая ассоциация
Американская психиатрическая ассоциация, основанная в 1844 году, является старейшей медицинской ассоциацией в стране.APA также является крупнейшей психиатрической ассоциацией в мире, в которую входят более 37 400 врачей, специализирующихся на диагностике, лечении, профилактике и исследовании психических заболеваний. Видение APA — обеспечить доступ к качественной психиатрической диагностике и лечению. Для получения дополнительной информации посетите www.psychiatry.org.
Об Американской академии семейных врачей
Основанная в 1947 году, AAFP представляет 136 700 врачей и студентов-медиков по всей стране.Это единственное медицинское общество, занимающееся исключительно первичной медико-санитарной помощью. Семейные врачи проводят примерно одно из пяти визитов к врачу — это 192 миллиона посещений ежегодно, что на 48 процентов больше, чем у следующей по посещаемости медицинской специальности. Сегодня семейные врачи оказывают больше помощи малообеспеченным и сельским жителям Америки, чем врачи любой другой медицинской специальности. Краеугольным камнем семейной медицины являются постоянные личные отношения пациента и врача, ориентированные на комплексную помощь. Чтобы узнать больше о специализации семейной медицины, позиции AAFP по вопросам и клинической помощи, а также для загружаемых мультимедийных материалов, посвященных семейной медицине, посетите веб-сайт www.aafp.org/media «. Для получения информации о здоровье, состоянии здоровья и благополучии посетите отмеченный наградами веб-сайт AAFP для потребителей http://www.familydoctor.org/.
Об Американской академии педиатрии
Американская академия педиатрии — это организация, в которую входят 67 000 педиатров первичной медико-санитарной помощи, педиатрических медицинских узких специалистов и педиатрических хирургических специалистов, занимающихся вопросами здоровья, безопасности и благополучия младенцев, детей, подростков и молодых людей.Для получения дополнительной информации посетите www.aap.org и подпишитесь на нас в Twitter @AmerAcadPeds.
Об Американском колледже врачей
Американский колледж врачей — крупнейшая специализированная медицинская организация в США, членами которой являются более чем 145 стран мира. В состав ACP входят 163 000 терапевтов (терапевтов), смежных специалистов и студентов-медиков. Врачи-терапевты — это специалисты, которые применяют научные знания и клинический опыт для диагностики, лечения и заботливого ухода за взрослыми по всему спектру — от здоровья до сложных заболеваний.Следите за ACP в Twitter, Facebook и Instagram.
Об Американском колледже акушеров и гинекологов
Американский колледж акушеров и гинекологов (ACOG) является ведущей в стране группой врачей, оказывающих медицинскую помощь женщинам. Как частная, добровольная, некоммерческая организация, состоящая из 60 000 членов, ACOG решительно выступает за качественное медицинское обслуживание женщин, поддерживает самые высокие стандарты клинической практики и непрерывного образования своих членов, способствует просвещению пациентов и повышает осведомленность своих членов и общественности. об изменении проблем, стоящих перед женским здоровьем.www.acog.org.
Об Американской остеопатической ассоциации
Американская остеопатическая ассоциация (AOA) представляет более 151 000 врачей-остеопатов (DO) и студентов-остеопатов; способствует общественному здоровью; поощряет научные исследования; выступает в качестве основного сертифицирующего органа для ДО; и является аккредитационным агентством для остеопатических медицинских школ. Чтобы узнать больше о доктринах и остеопатической философии медицины, посетите сайт www.osteopathic.org.
Исследователи выяснили, как генетическая мутация у мышей и обезьян влияет на вирусы
Национальная группа исследователей, возглавляемая учеными из Университета здравоохранения штата Юта и Университета Рокфеллера, определила, как генетическая мутация, обнаруженная у мышей и обезьян, влияет на такие вирусы, как ВИЧ и Эбола.Они говорят, что это открытие может в конечном итоге привести к разработке медицинских вмешательств на людях
Ген, называемый retroCHMP3, кодирует измененный белок, который нарушает способность некоторых вирусов выходить из инфицированной клетки и предотвращает заражение других клеток.
Обычно некоторые вирусы заключают себя в клеточные мембраны, а затем выходят из них, отпочковываясь от клетки-хозяина. RetroCHMP3 задерживает этот процесс на достаточно долгое время, чтобы вирус больше не мог ускользнуть.
Это было неожиданное открытие. Мы были удивлены тем, что небольшое замедление нашей клеточной биологии сводит на нет репликацию вирусов ».
Нельс Элде, доктор философии, старший автор исследования и эволюционный генетик, Департамент генетики человека Университета здравоохранения
Исследование появится в сети 30 сентября перед выпуском Cell за 14 октября.
RetroCHMP3 возник как дублированная копия гена, называемого заряженным мультивезикулярным телом белка 3 или CHMP3.В то время как у некоторых обезьян, мышей и других животных есть ретроCHMP3 или другие варианты, у людей есть только оригинальный CHMP3.
У людей и других существ CHMP3 хорошо известен тем, что играет ключевую роль в клеточных процессах, которые жизненно важны для поддержания целостности клеточной мембраны, межклеточной передачи сигналов и деления клеток.
ВИЧ и некоторые другие вирусы захватывают этот путь, чтобы отделиться от клеточной мембраны и инфицировать другие клетки. Основываясь на своих исследованиях, Элде и его коллеги подозревали, что дупликации CHMP3, которые они обнаружили у приматов и мышей, блокируют это в качестве защиты от вирусов, таких как ВИЧ, и других вирусных заболеваний.
Основываясь на этом представлении, Элде и другие ученые начали исследовать, могут ли варианты retroCHMP3 работать как противовирусное средство. В лабораторных экспериментах, проведенных в другом месте, более короткая, измененная версия человеческого CHMP3 успешно предотвратила отпочкование клеток ВИЧ. Но произошел сбой: модифицированный белок также нарушил важные клеточные функции, в результате чего клетки умирали.
В отличие от других исследователей, у Элде и его коллег из U of U Health были в наличии природные варианты CHMP3 от других животных.Итак, работая в сотрудничестве с исследователями Сэнфордом Саймоном из Университета Рокфеллера, а также с Фуонг Тьеу Шмиттом и Энтони Шмиттом из Университета штата Пенсильвания, они попробовали другой подход.
Используя генетические инструменты, они уговорили человеческие клетки произвести версию retroCHMP3, обнаруженную у беличьих обезьян. Затем они заразили клетки ВИЧ и обнаружили, что вирус с трудом отделяется от клеток, что, по сути, останавливает их на пути. И это произошло без нарушения метаболических сигналов или связанных с ними клеточных функций, которые могут вызвать гибель клеток.
«Мы очень рады этой работе, потому что некоторое время назад мы показали, что множество различных вирусов в оболочке используют этот путь, называемый путем ESCRT, для выхода из клеток», — говорит Уэс Сандквист, доктор философии, соавтор статьи. учится и заведует кафедрой биохимии Университета Юты. «Мы всегда думали, что это может быть момент, когда клетки смогут защитить себя от таких вирусов, но мы не понимали, как это могло произойти, не вмешиваясь в другие очень важные клеточные функции.”
Элде считает, что с эволюционной точки зрения это представляет собой новый тип иммунитета, который может быстро возникнуть для защиты от краткосрочных угроз.
«Мы думали, что путь ESCRT — это ахиллесова пята, которую вирусы, такие как ВИЧ и Эбола, всегда могли использовать, поскольку они отпочковываются и заражают новые клетки», — говорит Элде. «RetroCHMP3 перевернул сценарий, сделав вирусы уязвимыми. Двигаясь вперед, мы надеемся извлечь уроки из этого урока и использовать его для борьбы с вирусными заболеваниями ».
В частности, этот урок «повышает вероятность того, что вмешательство, замедляющее процесс, может быть несущественным для хозяина, но даст нам новый антиретровирусный препарат», — говорит Сэнфорд Саймон, доктор философии.D, соавтор исследования и профессор клеточной биофизики в Университете Рокфеллера.
Источник:
Университет здравоохранения штата Юта
Ссылка на журнал:
Rheinemann, L., et al. (2021) RetroCHMP3 блокирует размножение оболочечных вирусов без блокирования цитокинеза. Cell. doi.org/10.1016/j.cell.2021.09.008.
Экспрессия активированного Notch-родственного трансгена int-3 препятствует дифференцировке клеток и индуцирует неопластическую трансформацию в молочных и слюнных железах.
- C Джаппан,
- D Gallahan,
- C Stahle,
- Е Чу,
- G H Smith,
- G Merlino и
- R Каллахан
- Отдел биологии рака, Национальный институт рака, Национальные институты здравоохранения, Бетесда, Мэриленд 20892.
Аннотация
Экспрессия локуса int-3 активируется в опухолях молочной железы мышей в результате инсерционного мутагенеза мышами вирус опухоли молочной железы (MMTV). Интеграция провируса MMTV в локус int-3 способствует транскрипции и трансляции. фланкирующих клеточных последовательностей int-3, имеющих значительную гомологию с внутриклеточным доменом нейрогенного гена Notch дрозофилы и с генами регуляции клеточного цикла дрожжей cdc10 и SWI6.Определить in vivo последствия активированного int-3 были получены трансгенные мыши, несущие фрагмент геномной опухолевой ДНК, состоящий из LTR MMTV и фланкирующие клеточные последовательности int-3. Все шесть трансгенных мышей-основателей int-3 и потомство одной установленной линии демонстрировали сходные драматические фенотипические аномалии в тканях, в которых экспрессируется трансген. Очаговая и часто множественная плохо дифференцированные аденокарциномы молочной железы и слюны появились у большинства трансгенных мышей в период между 2 и 7 мес. возраст.Примечательно, что молочные железы были остановлены в развитии и имели дефицит лактации у всех самок мышей Int-3. В слюнные железы, железы слизистой оболочки носа и гайморовой пазухи, экстраорбитальные слезные железы и железы Хардера ювенильных и взрослых трансгенных мышей все содержали пролиферирующие незрелые протоковые клетки и были не полностью дифференцированы. Кроме того, все самцы трансгенных мышей int-3 были стерильны, по-видимому, в результате тяжелой гиперплазии придатка яичка.Эти находки демонстрируют in vivo, что экспрессия активированного Notch-родственного гена int-3 вызывает нарушение регуляции нормального развития. контроль и гиперпролиферация железистого эпителия.
Сноски
- Авторские права © Cold Spring Harbor Laboratory Press
Границы | Экспрессия формиат-тетрагидрофолатлигазы не улучшала рост, но препятствовала азотному и углеродному метаболизму Synechocystis sp.PCC 6803
Введение
Фиксация неорганического углерода фотоавтотрофными организмами через цикл Кальвина-Бенсона-Бассема (CBB) представляет собой биохимический процесс, который обеспечивает органический углерод почти для всех живых организмов на Земле. В природе факторы, ограничивающие рост фотосинтезирующих организмов, различаются в зависимости от вида и среды обитания и включают доступность воды, света и питательных веществ, например, комбинированных источников азота (Evans, 1997). Однако в современном сельском хозяйстве с использованием удобрений и часто орошения фиксация CO 2 стала фактором, ограничивающим скорость урожая сельскохозяйственных культур в условиях окружающей среды из-за неэффективности ключевого фермента, фиксирующего CO 2 цикла CBB, рибулозо-1,5-бисфосфаткарбоксилаза / оксигеназа (RubisCO) (Long et al., 2006; Черкез и др., 2006; Bar-Even et al., 2010). RubisCO обладает низкой каталитической скоростью и побочной реакцией оксигенации с образованием токсичного побочного продукта 2-фосфогликолата (2PG). 2PG должен метаболизироваться через фотодыхательный путь, который высвобождает ранее фиксированный CO 2 и высвобождает NH 3 (Bauwe et al., 2010). Было предпринято множество попыток улучшить фиксацию фотосинтетического углерода, например, сконструировать RubisCO для повышения каталитической эффективности и специфичности для CO 2 (Whitney et al., 2011). Другие попытки были направлены на повышение концентрации CO 2 в непосредственной близости от RubisCO, что было естественным образом достигнуто в ходе эволюции различных механизмов концентрации CO 2 (CCM) у цианобактерий, водорослей и растений C4 (Leegood, 2002; Badger and Price, 2003; Giordano et al., 2005; Long et al., 2018). В последние годы также пытались оптимизировать фотодыхание у растений, выражая различные реакции искусственного обхода для улучшения рециркуляции 2PG (Kebeish et al., 2007; Хагеманн и Бауве, 2016; South et al., 2019). Другой подход in vitro установил углеродосохраняющее фотодыхание путем преобразования гликолата через гликолил-КоА и гликолевый альдегид в промежуточные продукты цикла CBB (Trudeau et al., 2018).
В качестве альтернативы улучшению цикла CBB и фотодыхания, которые тесно связаны с первичным метаболизмом растений, было предложено создание совершенно новых синтетических путей связывания CO 2 . Shih et al.(2014) создали синтетический фотодыхательный обходной путь фиксации CO 2 у цианобактерий, который послужил основой для альтернативного пути фиксации углерода у цианобактерий, водорослей и растений. Schwander et al. (2016) смогли разработать и подтвердить путь фиксации in vitro CO 2 , цикл CETCH [(CoA) / этилмалонил-CoA / гидроксибутирил-CoA], который включает 11 ферментативных стадий. Прямая сборка этого синтетического пути в живых организмах является сложной задачей из-за ограниченного понимания сложного взаимодействия между различными ферментами, используемыми в этой синтетической сети.Кроме того, вмешательство синтетических сетей в сложный метаболический и регуляторный фон организма-хозяина может привести к нежелательным побочным реакциям и токсичности (Schwander et al., 2016).
Недавно формиат был предложен в качестве идеального сырья для биоэкономики, поскольку его можно производить с относительно высокой эффективностью из множества доступных ресурсов, таких как электрохимическое восстановление CO 2 и окисление природного газа (Bar-Even et al. ., 2013).Кроме того, формиат растворим и малотоксичен. Многие метилотрофные организмы могут расти, используя формиат в качестве единственного источника углерода (Marx et al., 2003). Установление дополнительного восстановления CO 2 до формиата в фотоавтотрофных организмах, таких как культурные растения, было предложено для поддержки фиксации CO 2 через цикл CBB (Bar-Even, 2018). Наиболее ценной точкой входа формиата в метаболизм первичного углерода является превращение в 10-формилтетрагидрофолат (формил-ТГФ) лигазой формил-ТГФ (FTL) (Bar-Even, 2016).FTL катализирует АТФ-зависимую киназную реакцию, которая дает промежуточный формилфосфат, и активированная формильная группа затем переносится на ТГФ с образованием формил-ТГФ (Mejillano et al., 1989). FTL не создает напрямую углерод-углеродную связь, но активирует формиат, что делает его хорошим электрофилом для последующих реакций с нуклеофильным атомом углерода. FTL — единственная известная естественная реакция фиксации формиата, которая поддерживает форматотрофный рост (Bar-Even, 2018). У большинства организмов формил-ТГФ естественным образом участвует в синтезе пуринов, а также в формилировании инициатора метионил-тРНК Met в бактериях, митохондриях и хлоропластах.Он также может быть преобразован в метилен-ТГФ через бифункциональную метилен-ТГФ-дегидрогеназу / метенил-ТГФ-циклогидролазу (FolD) (Hanson and Roje, 2001). Впоследствии метилен-ТГФ вместе с глицином может служить для биосинтеза серина посредством серин-гидроксиметилтрансферазы (SHMT), что представляет собой важный этап в метаболизме C1 большинства организмов (рис. 1). У растений и других кислородных фототрофов стадия высвобождения CO 2 через расщепление глицина в фотодыхательном пути приводит к образованию большого количества метилен-ТГФ, который затем используется SHMT для синтеза серина за счет второй молекулы глицина.Обсуждалось, что увеличенный пул метилен-ТГФ из-за эффективного включения формиата может превратить фотодыхание в меньшее высвобождение CO 2 или даже на фиксацию CO 2 , когда реакция глицин-декарбоксилазы обратная. Путь ассимиляции, включающий обратный поток глициндекарбоксилазы, был последовательно установлен в E. coli , доказывая рассчитанную выше кинетическую осуществимость и функциональность сконструированного CO 2 -фиксирующего шунта (Bar-Even et al., 2010; Ишай и др., 2017; Банг и Ли, 2018; Деринг и др., 2018; Ким и др., 2020).
Рисунок 1. Путь ассимиляции синтетического формиата (FA) у Synechocystis sp. PCC 6803. Ферменты, присутствующие в хозяйской клетке Synechocystis , отмечены зеленым, в то время как дополнительный фермент, необходимый для включения формиата, отмечен розовым. FTL, формиат-ТГФ-лигаза; FolD, бифункциональная метилен-ТГФ-дегидрогеназа / метенил-ТГФ-циклогидролаза; GDC, комплекс глициндекарбоксилазы; SHMT, серингидроксиметилтрансфераза.
Здесь мы стремились установить ассимиляцию формиата у цианобактерий, которые используют световую энергию для кислородного фотосинтеза и цикл CBB для ассимиляции CO 2 , как и у растений (Hohmann-Marriott and Blankenship, 2011). Мы выбрали модельный организм Synechocystis sp. PCC 6803 (далее Synechocystis ) для экспрессии ftl , что должно обеспечивать утилизацию формиата и его преобразование в биомассу через фотодыхательный метаболизм 2PG (рис. 1).Исследование было инициировано с целью проверить, может ли ассимиляция формиата быть установлена в прокариотическом оксигенатном фототрофе перед тем, как сделать следующий шаг в инженерии сельскохозяйственных культур. В отличие от наших ожиданий, знания из E. coli нельзя было напрямую перенести на Synechocystis , потому что вместо улучшенного роста на формиате мы обнаружили заметное изменение клеточного метаболизма C / N в штамме, экспрессирующем ftl .
Материалы и методы
Штаммы и условия культивирования
Штаммы цианобактерий, использованные в данной работе, перечислены в дополнительной таблице S1.Глюкозотолерантный штамм Synechocystis sp. PCC 6803 служил диким типом (WT). Культивирование мутантов и трансгенных штаммов проводили при 50 мкг / мл эритромицина (Ery). Аксенические культуры Synechocystis поддерживали на чашках с агаром (BG 11, pH 8, отвержденный 0,9% агаром Кобе) при 30 ° C при непрерывном освещении 50 мкмоль фотонов m -2 с -1 . Анализ капельного разведения проводился с последовательным разведением 2 мкл клеточной суспензии при OD 750 нм = 1 нанесение пятен на чашки с агаром без антибиотиков и с различными добавками, как указано в тексте.Жидкие культуры выращивали в периодическом режиме на среде BG 11. Суспензии клеток зажигали либо окружающим воздухом (0,04% CO 2 ), либо обогащенным воздухом CO 2 [5% (об. / Об.)] При 30 ° C при непрерывном освещении фотонами 100 мкмоль м –2 s –1 . Заражение гетеротрофными бактериями оценивали, разливая 0,2 мл культуры на чашки с агаром LB.
E. coli DH5α, культивированный в среде LB при 37 ° C, использовали для обычных манипуляций с ДНК.
Создание трансгенных штаммов цианобактерий
Гены сверхэкспрессии и мутации амплифицировали с помощью ПЦР с использованием специфичных для генов праймеров (см. Дополнительную таблицу S1). Все продукты ПЦР лигировали с pGEM ® -T (Promega, Walldorf, Германия) и проверяли секвенированием (Microsynth Seqlab, Göttingen, Германия). Для сверхэкспрессии FTL в Synechocystis , ftl из Methylobacterium extorquens AM1 (Yishai et al., 2017) амплифицировали с праймерами, добавляющими сайты Bgl II и Mun I на его 5 ‘и 3’ концах. и вставляли под контролем индуцированного сильным светом промотора P psbAII в плазмиду pAII, несущую кассету устойчивости к эритромицину (Lagarde et al., 2000).
Экстракция белка из Synechocystis и вестерн-блоттинга
Двадцать мл клеток Synechocystis (OD 750 нм = 1) были собраны центрифугированием при 6000 × g в течение 10 минут и немедленно заморожены в жидком азоте и сохранены при –80 ° C для дальнейшей экстракции белка. Замороженные клетки ресуспендировали в 200 мкл буфера для гомогенизации [75 мМ Трис-HCl pH 7,5, 1,5 мМ EDTA, 1,5 мМ PMSF, 1,5 мМ NaHSO 3 , 0,15 мМ Pefabloc (Merck, Дармштадт, Германия)].К образцам добавляли стеклянные шарики (диаметр 0,5 мм) и подвергали 5 циклам замораживания-оттаивания. Количественный анализ белка проводили с помощью Amidoblack (Schulz et al., 1994). Калибровочная кривая была построена с различной концентрацией бычьего сывороточного альбумина.
SDS-PAGE и вестерн-блоттинг проводили в соответствии со стандартными протоколами (Laemmli, 1970; Towbin et al., 1979). Антитело к FTL вырабатывали у кролика против рекомбинантного FTL, меченного His, компанией Davids Biotechnology GmbH (Регенсбург, Германия).
Ферментные анализы
N-концевой His 6 с меткой ftl был получен после лигирования фрагмента Sac I / Kpn I в pBAD / HisA. Рекомбинантный FTL был очищен от клеток штамма BL21 E. coli (DE3) . Предварительные культуры инокулировали в свежую среду LB до OD 600 нм 0,1 и инкубировали при 37 ° C до OD 600 нм 0,6-0,8 перед индукцией экспрессии фут-1 с 0.02% L-арабиноза. Экспрессию проводили в течение 4 ч при 37 ° C. Клетки собирали центрифугированием при 6000 × g в течение 10 мин и промывали буфером для лизиса [20 мМ Трис-HCl pH 7,8, 50 мМ NaCl, 10 мМ имидазол]. Клетки суспендировали в буфере для лизиса с добавлением лизоцима 1 мг / мл и инкубировали на льду в течение 30 мин. Затем полученную суспензию обрабатывали ультразвуком в течение 3 × 30 с на максимальной мощности. Лизат очищали центрифугированием при 14000 × g в течение 30 мин при 4 ° C.
His-меченых белков очищали с помощью IMAC в соответствии с протоколом производителя (QIAexpressionist, Qiagen) в режиме гравитационного потока.Лизат трижды пропускал через Ni-NTA, после чего следовали три стадии промывки с использованием 20 порционных объемов промывочного буфера [20 мМ Трис-HCl pH 7,8, 1 М NaCl, 40 мМ имидазол]. Элюцию проводили одним порционным объемом элюирующего буфера [20 мМ фосфат натрия, pH 7,8, 500 мМ NaCl, 300 мМ имидазол] и при желании повторяли до 3 раз. Чистый рекомбинантный FTL фракции элюирования 2 использовали для биохимических анализов или продукции антител.
Анализ активности FTL измеряет превращение THF и формиата в 10-формил-THF, который затем количественно превращался в метенил-THF добавлением кислоты, как описано (Marx et al., 2003). Анализ проводили при 25 ° C в течение 10 мин. Метенил-ТГФ определяли спектрофотометрически по его характеристическому максимуму поглощения при 350 нм. 1 мл стандартной смеси для анализа содержал 0,1 М трис-буфер (pH 8,0), 2 мМ тетрагидрофолат (ТГФ) (Merck, Дармштадт, Германия), 10 мМ MgCl 2 , 5 мМ АТФ, 200 мМ формиат натрия и 50 мкг клеток. белковый экстракт. Реакцию останавливали в разные моменты времени (1, 5 и 10 мин) добавлением 2 мл 0,36 н. HCl. Анализ проводили в условиях низкого содержания кислорода, установленных потоком N 2 , чтобы минимизировать окислительную деградацию вспомогательного субстрата ТГФ, тогда как фермент FTL (EC 6.3.4.3) сам по себе не содержит чувствительного к кислороду кофактора. Затем определяли оптическую плотность метенил-ТГФ при 350 нм.
Ферментный анализ был выполнен с тремя техническими повторностями, и даны средние значения ± стандартное отклонение.
Количественное определение растворимых аминокислот и органических кислот
Предварительные культуры культивировали при постоянном освещении и аэрировали 5% CO. 2 в среде BG11. Клетки разбавляли до OD 750 нм = 1 и переводили на барботирование окружающим воздухом с 10 мМ формиатом натрия или без него при постоянном освещении в течение 24 часов.Свободные аминокислоты и органические кислоты экстрагировали из замороженных гранул клеток Synechocystis из 10 мл культур при OD 750 нм = 1 с использованием 80% этанола при 65 ° C в течение 3 часов. Суспензии клеток тщательно перемешивали встряхиванием каждые 30 мин. Клеточный дебрис удаляли центрифугированием при 6000 × g в течение 15 мин. супернатант лиофилизировали и повторно растворяли в 1 мл воды класса MS (Carl Roth, Карлсруэ, Германия). Аминокислоты и органические кислоты разделяли с помощью жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией (ЖХ-МС / МС) с колонкой для ВЭЖХ Discovery H5 F5 (Merck, Дармштадт, Германия), как описано у Reinholdt et al.(2019).
Все анализы повторяли 3 раза с независимым культивированием клеток и в трех технических повторах каждый. Попарный тест t- применяли для статистического сравнения средних значений всех 9 наборов данных.
Выделение РНК и микрочип
Для транскриптомики клетки культивировали с добавлением или без добавления 10 мМ формиата натрия в течение 3 дней при постоянном освещении и барботировании окружающего воздуха. Клетки из 10 мл клеточной суспензии собирали быстрым центрифугированием при 4 ° C.Осадки клеток замораживали в жидком N 2 и хранили при -80 ° C. Выделение РНК, прямое мечение РНК и гибридизация ДНК-микрочипов выполняли, как описано ранее (Gärtner et al., 2019). Для транскриптомного анализа использовали микроматрицу высокого разрешения, изготовленную Agilent (ID дизайна 075764, формат 8 × 60 K; макет слайда = IS-62976-8-V2). Конструкция массива позволяет осуществлять прямую гибридизацию общей РНК без преобразования в кДНК и охватывает зонды для всех аннотированных генов, а также других транскриптов, идентифицированных в ходе всесторонних исследований секвенирования РНК.Перед маркировкой суммарную РНК инкубировали с Turbo DNase (Invitrogen) в соответствии с протоколом производителя и осаждали смесью этанол / ацетат натрия. Дополнительные сведения о протоколе мечения и гибридизации можно найти в Voß and Hess (2014).
Необработанные данные были дополнительно обработаны с помощью R-пакета Limma. Медианные интенсивности сигналов были скорректированы по фону и нормированы по квантилям. Гибридизацию микроматрицы проводили с двумя биологическими повторами для каждой обработки. Используемая конструкция матрицы содержала три технических повтора для каждого отдельного зонда, и почти все функции были охвачены несколькими независимыми зондами.Средние значения для всех зондов данного признака использовали для окончательного расчета относительных соотношений транскриптов, нормализованных к необработанному WT. Для статистической оценки, т.е. расчета значения p , использовалась процедура Бенджамини – Хохберга. Дополнительные детали обработки данных и статистической оценки с использованием программного обеспечения R были описаны ранее (Георг и др., 2009). Полный массив данных депонирован в базе данных GEO под регистрационным номером GSE143785.
14 Поглощение C-формиата14 Формиат натрия, меченный С, был приобретен у Merck (Дармштадт, Германия).Предварительные культуры культивировали при постоянном освещении, аэрировали окружающим воздухом и разбавляли до OD 750 нм = 1 перед экспериментом. Добавляли заданные количества формиата натрия, содержащего 5% мас. 14 C-меченный формиат натрия, и 1 мл клеточной суспензии фильтровали через нитроцеллюлозные мембраны (45 мкм) и немедленно промывали 20 мл среды BG11 в заданные моменты времени. Мембраны переносили в 5 мл сцинтилляционной смеси (Ultima Gold, PerkinElmer) и анализировали в сцинтилляционном счетчике (Tri-Carb 2810TS, PerkinElmer).Концентрация рассчитывалась по индивидуальной калибровочной кривой для каждого эксперимента. Все анализы повторяли трижды с независимым культивированием клеток.
13 Анализ структуры маркировки CДля стационарного изотопного отслеживания протеиногенных аминокислот клетки предварительно культивировали с воздухом, обогащенным CO 2 (5% CO 2 ) в среде BG11. Клетки WT или штамма exFTL перемещали в окружающий воздух, начиная с OD 750 нм = 0.2 при постоянном освещении и культивировали в течение 5 дней в присутствии либо 13 C-меченного, либо немеченого формиата натрия. 2 мл клеток (OD 750 нм = 1) собирали центрифугированием в течение 5 мин при 11000 × g . Осадок гидролизовали инкубацией с 1 мл 6 н. Соляной кислоты в течение 24 ч при 95 ° C. Кислоту выпаривали нагреванием до 95 ° C. Гидролизованные аминокислоты разделяли и анализировали, как описано Yishai et al. (2017). Гидролизованные аминокислоты разделяли с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (Acquity, Waters, Милфорд, Массачусетс, США) с использованием колонки с обращенной фазой C 18 (Waters) в соответствии с предыдущим описанием.Масс-спектры получали с использованием масс-спектрометра Exactive TM (Thermo Fisher Scientific). Стандарты аутентичных аминокислот (Merck, Дармштадт, Германия) анализировали в тех же условиях, чтобы определить типичное время удерживания. Для анализа данных использовался программный пакет Xcalibur (Thermo Fisher Scientific).
Все анализы были выполнены с тремя биологическими повторностями для каждой обработки. Типичный результат показан здесь.
Результаты и обсуждение
Воздействие внешнего формиата на
Synechocystis WTПеред установлением ассимиляции формиата мы проверили способность Synechocystis импортировать внешний формиат в клетку.С этой целью были проведены анализы поглощения с использованием 14 C-меченного формиата натрия для проверки поглощения формиата Synechocystis (рис. 2A). Быстрое начальное накопление формиата в клетках сменялось насыщением через 20 — 30 мин. На основании измерений поглощения мы рассчитали начальную скорость поглощения формиата 50 нмоль h –1 мл –1 OD 750 нм –1 , когда анализ проводился при pH 7 вместо pH 8.В более кислых условиях формиат (pKa 3,74 для муравьиной кислоты) менее заряжен, что, очевидно, способствовало его начальной скорости поглощения. Дальнейший анализ начальной скорости поглощения клетками с добавлением формиата натрия различной концентрации выявил зависящее от концентрации увеличение и не привело к насыщению (рис. 2В). Формиат, независимо от того, диссоциирован он или нет, должен легко проходить через внешнюю мембрану через порины, и поглощение довольно ограничено проницаемостью плазматической мембраны. Предполагая активный транспорт формиат-аниона, концентрация 200 мМ экзогенного формиата натрия должна превышать сродство предполагаемого переносчика (например,g., FocA в E. coli с K m 119 мМ, Wiechert and Beitz, 2017) и не приводит к дальнейшему увеличению скорости его поглощения. Однако наблюдали линейное снижение скорости поглощения, коррелирующее с применяемой экзогенной концентрацией, что указывает на то, что недиссоциированный формиат натрия проникает в клетку скорее через диффузию, чем через специфические переносчики. Более того, семейство переносчиков формиата-нитрита, облегчающих импорт и экспорт формиата у протеобактерий (Suppmann and Sawers, 1994), еще не было идентифицировано у цианобактерий (Hahn and Schleiff, 2014).
Рисунок 2. Поглощение формиата натрия и его влияние на клетки Synechocystis. (A) Анализ поглощения с использованием 10 мМ формиата натрия, содержащего 5% мас. 14 C-меченный формиат натрия с клетками WT, выращенными в BG11 при pH 8 и 7 соответственно. Приведены средние значения трех независимых повторов ± SD (B) Начальная скорость поглощения клеток, инкубированных в течение 15 мин с 1–200 мМ 14 C-меченный формиат при pH 8. Приведены средние значения трех независимых повторов ± SD ( C) Толерантность клеток WT к формиату.Последовательные разведения клеточной суспензии (OD 750 нм = 1) наносили на чашки с агаром BG11, pH 8, с добавлением различных концентраций формиата натрия (1–200 мМ). Фотографии показывают репрезентативные результаты через 7 дней при постоянном освещении. (D) Фотосинтетический O 2 скорости эволюции в присутствии различных концентраций формиата (0–50 мМ) и интенсивности света (25–100 мкмоль фотонов м –2 с –1 ). Приведены средние значения трех независимых повторов ± стандартное отклонение (* p <0.05).
Было показано, что формиат может быть токсичным для оксигенных фототрофов при более высоких концентрациях, нарушая сайт связывания бикарбоната в фотосистеме II (Stemler and Radmer, 1975; Semin et al., 1990; Shevela et al., 2007). Таким образом, было исследовано влияние эндогенного формиата на Synechocystis дикого типа (WT). Во-первых, толерантность клеток WT к формиату изучалась на чашках с агаром, дополненных концентрациями формиата в диапазоне от 0 до 200 мМ (рис. 2С).Рост Synechocystis не изменялся до 50 мМ формиата и несколько снижался, если концентрация формиата превышала 100 мМ. Тем не менее, клетки выживали при концентрациях формиата до 200 мМ. Во-вторых, скорость роста клеток WT оценивалась в жидкой среде, чтобы охарактеризовать долгосрочное воздействие формиата. Не наблюдали значительных различий в скорости роста в присутствии 10 и 20 мМ формиата по сравнению с необработанными клетками в течение 7 дней. Аналогичные наблюдения были выполнены при разной интенсивности света (50, 100 и 200 мкмоль фотонов m –2 с –1 ) и различных концентрациях неорганического углерода (0.04% или 5% CO 2 ), соответственно (дополнительная таблица S2). В-третьих, влияние формиата на фотосинтез изучали с использованием клеток Synechocystis WT, подвергнутых воздействию различных концентраций формиата и интенсивности света во время измерения фотосинтетического выделения кислорода. На выделение кислорода не влияло 10 мМ формиата при всех протестированных значениях интенсивности света (25, 50 или 100 мкмоль фотонов м -2 с -1 ), но оно сильно подавлялось при 50 мМ формиате при интенсивности света 50 и 100 мкмоль фотонов. м –2 с –1 (рисунок 2D).
В совокупности эти данные показали, что формиат проникает в клетки, вероятно, посредством диффузии, и низкие концентрации до 20 мМ формиата хорошо переносятся Synechocystis , в то время как более высокие концентрации (> 50 мМ) отрицательно влияют на фотосинтез и рост. Как показано на примере E. coli , добавление 10 мМ формиата обеспечивало достаточное количество C1-единиц для синтеза серина через путь ассимиляции формиата в сериновом ауксотрофном штамме (Yishai et al., 2017; Ким и др., 2019). Поэтому для последующих экспериментов использовали 10 мМ формиат. Как правило, описанные выше эксперименты подтвердили, что Synechocystis обеспечивает подходящую основу для реализации пути ассимиляции формиата.
Влияние экспрессии формиат-тетрагидрофолатлигазы (FTL) на Synechocystis
Гетерологичная экспрессия ftl должна быть достаточной для завершения пути ассимиляции формиата, потому что все другие необходимые ферменты аннотированы в геноме Synechocystis (доступ к банку генов NC_000911).FTL из Methylobacterium extorquens AM1 был выбран для экспрессии в Synechocystis , поскольку экспрессия этого гена успешно поддерживала ассимиляцию формиата в E. coli по желаемому пути (Yishai et al., 2018; Kim et al., 2020).
Ген ftl был стабильно вставлен в сайт psbA2 на хромосоме Synechocystis , таким образом, его экспрессия контролируется сильным светоиндуцированным промотором P psbA 2 (Lagarde et al., 2000). Генотип и экспрессия ftl в полученном штамме exFTL подтверждали с помощью ПЦР, окрашивания Кумасси и вестерн-блоттинга. Кроме того, активность фермента FTL была обнаружена в exFTL, но не в WT (рис. 3A). Как и ожидалось, экспрессия ftl , управляемая промотором psbA2 , привела к сильному накоплению белка в exFTL (дополнительная фигура S1). Фенотипирование exFTL выявило скорость роста, аналогичную WT без дополнительного внешнего формиата, в то время как добавление 10 мМ формиата натрия привело к незначительному стимулирующему эффекту на exFTL (рис. 3B).
Фигура 3. Влияние экспрессии ftl и добавления формиата на рост, а также пулы глицина и серина в клетках exFTL и Synechocystis дикого типа (WT). (A) Активность фермента FTL сравнивали между exFTL и диким типом. Приведены средние значения ± стандартное отклонение трех независимых измерений. На вставленном рисунке показана подтвержденная экспрессия FTL в exFTL посредством иммунного декорирования с помощью специфических антител против FTL. (B) Скорости роста exFTL и WT, инкубированных с 10 мМ формиатом натрия (белые столбцы) или без формиата (черные столбцы).Клетки культивировали при атмосферном воздухе и 100 мкмоль фотонов m –2 с –1 . Приведены средние значения трех независимых культур ± SD (C), уровней серина и (D) глицина (выраженные как кратные изменения) в WT и exFTL, выращенных с добавлением формиата и без него. Клетки культивировали при атмосферном воздухе и 100 мкмоль фотонов m –2 с –1 . Образцы собирали через 24 часа после добавления 10 мМ формиата и анализировали с помощью ЖХ-МС / МС. Приведены средние значения ± стандартное отклонение трех независимых повторов. (E) Скорости роста exFTL и WT, инкубированных с формиатом натрия и / или глицином. Культуры WT и exFTL выращивали и контролировали в мультикультиваторе при окружающем воздухе и 100 мкмоль фотонов m –2 с –1 в среде BG11 с добавлением или без 10 мМ формиата или (и) 3 мМ глицина. В среду также добавляли 20 мМ MgCl 2 для снижения токсичности глицина при добавлении глицина. Приведены средние значения ± стандартное отклонение трех независимых повторов (для всех фигур: * p <0.05 и *** p <0,001 по сравнению с соответствующим образцом дикого типа).
Метаболические последствия экспрессии
ftl в SynechocystisЗатем мы сравнили метаболом WT и exFTL в присутствии и в отсутствие 10 мМ формиата. Существенные различия, особенно в пулах серина и глицина (фиг. 3C, D), но также и во многих других метаболитах (фиг. 4A), наблюдались при добавлении формиата. Добавление формиата приводило к примерно 3-кратному увеличению уровней серина в exFTL по сравнению с WT, в то время как в отсутствие формиата было обнаружено лишь небольшое различие (фигура 3C).Напротив, глицин уменьшился примерно в 3 раза в exFTL при добавлении формиата, тогда как без добавления формиата наблюдались лишь небольшие различия (рис. 3D). Пониженное содержание глицина подразумевает, что количество глицина, как предшественника серина в реакции SHMT, может быть ограничивающим фактором для более высокого включения формиата в серин. Поэтому были проведены эксперименты по выращиванию, в которых среда была дополнена 3 мМ глицином вместе с 10 мМ формиатом натрия. Кроме того, добавляли 20 мМ MgCl 2 , чтобы снизить токсичность глицина для Synechocystis (Eisenhut et al., 2007). В соответствии с нашим предположением, exFTL показал значительно более высокую скорость роста, чем WT, в присутствии как формиата, так и глицина, тогда как при добавлении только глицина или формиата появлялась лишь небольшая, несущественная разница (рис. 3E).
Фигура 4. Относительные изменения выбранных метаболитов и 13 C-мечения в exFTL по сравнению с Synechocystis дикого типа (WT). (A) Клетки WT или exFTL собирали через 24 часа после добавления 10 мМ формиата натрия (белые столбцы) или без него (черные столбцы), инкубировали при окружающем воздухе и 100 мкмоль фотонов m –2 с –1 .Содержание метаболитов представляет собой средние значения ± стандартное отклонение относительно среднего значения WT из трех независимых биологических повторов. (* p <0,05; ** p <0,01; *** p <0,001 по сравнению с соответствующим образцом WT. ) 2ПГ, 2-фосфогликолят; 3-PGA, 3-фосфоглицерат; Гли, глицин; Сер, серин; Цис, цистеин; Его, гистидин; Ала, аланин; Вал, валин; Лей, лейцин; Лиз, лизин; Thr, треонин; Аспартат; Асн, аспарагин; Мет, метионин; Иль, изолейцин; Глу, глутамат; Gln, глутамин; Pro, пролин; Арг, аргинин; 2OG, 2-оксоглутарат. (B) Synechocystis WT и exFTL были предварительно культивированы в условиях высокого содержания углерода, а затем перенесены в условия окружающей среды, инкубированы либо с немеченым формиатом, 13 C-меченым формиатом или без формиата в условиях окружающего воздуха и фотонов 100 мкмоль м –2 с –1 на 5 дней. Приведены результаты одного типичного эксперимента.
Однако изменения в пулах серина и глицина были частью более общих метаболических изменений в exFTL, тогда как на метаболом WT добавление формиата почти не повлияло (рисунок 4A и дополнительный рисунок S2).Например, уровень продукта карбоксилирования RubisCO 3PGA увеличился, в то время как количество продукта оксигенации RubisCO 2PG в стационарном состоянии снизилось в exFTL. Кроме того, экспрессия ftl в Synechocystis вызвала значительное снижение содержания 2-оксоглутарата (2OG) и других промежуточных продуктов цикла трикарбоновой кислоты (TCA) уже в отсутствие формиата. Аналогичные наблюдения были сделаны для аминокислот лейцин, пролин, гистидин, валин и фенилаланин.Некоторые из этих изменений были усилены добавлением 10 мМ формиата натрия (Рисунок 4A и дополнительный рисунок S2). В случае валина добавление формиата спасало первоначальное снижение до уровня, подобного WT, а гистидин даже превышал уровень WT в 2 раза. Для лизина, треонина и аспарагина, происходящих из оксалоацетата, содержание увеличивалось при добавлении формиата по сравнению с необработанными exFTL и WT, соответственно.
Две аминокислоты, наиболее непосредственно связанные с C1-пулом через биосинтез, опосредованный их производными THF, — метионин и гистидин — продемонстрировали различные регуляции при добавлении формиата.В то время как уровень гистидина в exFTL явно увеличивался при добавлении формиата, метионин, по-видимому, не изменялся ни при каких условиях роста (фигура 4A и дополнительная фигура S2). Интересно, что соотношение между глутамином и глутаматом изменилось в exFTL при добавлении формиата (рис. 4A). Эти изменения обычно связаны с ограничивающими условиями для C – и соответствуют измененным количествам 2PG (Eisenhut et al., 2008). В то время как изменения других метаболитов, таких как цитрат, сукцинат, а также серин и глицин, согласуются с фенотипом, ограниченным C — , 2PG, 3PGA и 2OG полностью противоречат этой гипотезе.Более того, не на все эти метаболиты влияла исключительно экспрессия ftl независимо от добавления формиата.
Среди всех обнаруженных метаболитов альфа-аминомасляная кислота (AABA) показала самое высокое относительное изменение. Его уровни увеличивались до 8 раз в exFTL при добавлении формиата (дополнительный рисунок S2). Этот метаболит может возникать в результате расщепления серина на цистеин с помощью оксобутаноата (дополнительный рисунок S3), что также может объяснить увеличение цистеина, вызванное формиатом.
Чтобы проверить, включен ли поступающий извне формиат в клеточную биомассу, образец 13 C-мечения протеиногенных аминокислот оценивали в клетках, выращенных в присутствии 13 C-меченного формиата натрия в течение 5 дней. Включение 13 C в аминокислоты метионин, гистидин, глицин и серин было проанализировано, чтобы выяснить, происходят ли C1-строительные блоки для их биосинтеза из 13 C-формиата в exFTL. Как и ожидалось, глицин не был помечен (рис. 4B), что свидетельствует о том, что окисление формиата не происходило в Synechocystis , поскольку оно могло вызвать маркировку всех аминокислот.Однако серин также оказался полностью немеченым в exFTL, несмотря на его массовое накопление в присутствии формиата. Только метионин и гистидин были немного больше 13 C-меченых в exFTL по сравнению с инкубацией с немеченым формиатом (фиг. 4B). Эти результаты показали, что довольно небольшое количество C1-звеньев, производных формиата, было использовано для синтеза метионина и гистидина, но не для продукции серина. В отличие от предыдущих исследований с разработанными штаммами E. coli , поставленный формиат не был источником увеличенного пула серина в Synechocystis (Yishai et al., 2017, 2018; Банг и Ли, 2018; Деринг и др., 2018; Ким и др., 2019).
Анализ изменений транскриптома в exFTL
Результаты 13 C-мечения показали, что повышенное накопление серина в exFTL не является результатом значительного FTL-опосредованного включения формиата. Следовательно, измененное соотношение серин / глицин, вероятно, произошло из-за некоторого регулирующего воздействия экспрессии ftl в Synechocystis . Чтобы проверить это предположение, были выполнены транскриптомные анализы с использованием микроматрицы ДНК с РНК, выделенной из клеток WT и exFTL, культивированных с формиатом и без него.Существенные различия в экспрессии генов между WT и exFTL были обнаружены в отсутствие формиата, тогда как добавление формиата еще больше изменило характер экспрессии в exFTL (дополнительный рисунок S4). Напротив, добавление формиата оказало лишь незначительное влияние на экспрессию генов в клетках WT, что согласуется с небольшими изменениями в отношении роста и метаболома, о которых сообщалось ранее. По сути, только оперон hliB-lilA ( ssr2595-slr1544 ), который кодирует небольшой хлорофилл-связывающий белок ScpD (также называемый HliB) и LilA, который является членом расширенного светособирающего белка. семья (Куфрик и др., 2008), превысила порог индукции в 2 раза. Кроме того, субъединицы cmpB ( slr0041 ) и cmpC (slr0043 ), кодирующие субъединицы бикарбонатного транспортера BCT1 типа ABC, показали более чем 2-кратное снижение экспрессии (другие гены транспортера BCT1 также были подавлены, но ниже уровень значимости, полный набор данных доступен под инвентарным номером GSE143785).
Глобальное сравнение экспрессии генов показало, что 272 транскрипта стали значимыми ( p <0.05) более сильно экспрессировались, тогда как 232 были менее экспрессированы в exFTL по сравнению с WT в обоих условиях (порог значимости был 2-кратным). Гены с усиленной регуляцией относятся ко многим различным категориям, включающим множество генов рибосомных белков и ферментов C1, азотного и углеродного метаболизма (примеры см. В таблицах 1, 2). Значительные изменения в экспрессии были также обнаружены для генов, участвующих в биосинтезе серина и связанных процессах, например, фотодыхании (рис. 5). Чтобы оценить влияние FTL на количество транскриптов, мы сначала сосредоточились на генах, кодирующих ферменты, тесно связанные с активностью FTL.
Таблица 1. Экспрессия генов, кодирующих белки, участвующие в фотосинтезе, фотодыхании, а также в метаболизме первичного углерода, аминокислот и пуринов в exFTL по сравнению с диким типом (WT).
Таблица 2. Экспрессия генов, связанных с синтезом фолиевой кислоты и метаболизмом азота в exFTL по сравнению с диким типом (WT).
Фигура 5. Экспрессия генов, кодирующих белки, участвующие в первичном углеродном и азотном метаболизме в exFTL, по сравнению с Synechocystis дикого типа (WT).Результаты представлены в виде относительного содержания транскриптов, нормализованного к необработанной WT. Значения, представленные на рисунках, являются средними для двух биологических повторов (* p <0,05 по сравнению с необработанным образцом дикого типа). Номенклатура генов соответствует базе данных KEGG.
Серин может синтезироваться фотодыхательным метаболизмом 2PG и фосфосериновым путем в Synechocystis (Klemke et al., 2015). В последнем пути серин происходит из 3PGA и производится посредством трех ферментативных реакций: 3-фосфоглицератдегидрогеназа (SerA), фосфосеринтрансаминаза (PSTA) и фосфосеринфосфатаза (PSP).Гены serA и pstA были значительно активированы в exFTL по сравнению с WT, тогда как psp показали только небольшое, несущественное увеличение количества транскриптов. При добавлении формиата экспрессия ни одного из трех генов не усиливалась, а несколько подавлялась (фиг. 5 и таблица 1). Пул серина связан с пулом глицина обратимым действием SHMT (кодируемого glyA ), который превращает серин в глицин и метилен-THF или наоборот .Глицин также может происходить из фотодыхательного метаболизма 2PG, где он декарбоксилируется глициндекарбоксилазой (GDC). Экспрессия всех четырех генов GDC была скоординированно усилена в exFTL, но только ген gcvH , кодирующий субъединицу H белка, был значительно повышен (гены субъединиц P, T и L были примерно в 1,5 раза выше). выражено). Однако добавление формиата снижает экспрессию генов субъединиц L и P GDC до уровня, подобного WT, что делает маловероятным, что снижение количества глицина в exFTL с добавлением формиата было связано с измененной экспрессией GDC.Только экспрессия glyA , кодирующего SHMT, немного подавлялась при добавлении формиата. Однако изменения экспрессии не согласовывались с наблюдаемым накоплением серина и потреблением глицина в условиях с добавлением формиата в exFTL, поскольку наиболее сильные изменения транскрипта наблюдались, если этот штамм выращивали в условиях без формиата (таблица 1). Незначительное подавление экспрессии glyA при добавлении формиата в exFTL может частично объяснить накопление серина, когда мы предполагаем, что активность SHMT в основном используется для синтеза C1-единиц путем преобразования серина в глицин и 5,10-метилен ТГФ и в незначительной степени. превращает 5,10-метилен-ТГФ и глицин в серин (фотодыхательное направление).Кроме того, известно, что активность SHMT ингибируется 5-формил-THF (рис. 6), который может быть получен из 5,10-метенил-THF самим SHMT (Goyer et al., 2005; Collakova et al., 2008 ). Следовательно, комбинированное небольшое подавление его экспрессии и возможное ингибирование активности SHMT согласуется с наблюдаемым накоплением серина при добавлении формиата в exFTL (фиг. 6).
Рисунок 6. Схема, показывающая вероятное взаимодействие фотодыхания и одноуглеродного (C1) метаболизма у Synechocystis , экспрессирующего фут-1 .5-FCL, 5-формил-THF циклолигаза. Возможное ингибирование активности серин-гидроксиметилтрансферазы (SHMT) 5-формил-ТГФ, а также активности 5,10-метилен-ТГФ дегидрогеназы 10-формил-ТГФ показано пунктирными линиями.
Кроме того, ферменты, участвующие в биосинтезе пурина, метионина и гистидина, были более высоко экспрессированы в условиях отсутствия формиата в exFTL, чем в WT (Таблица 1), что вместе с измененной экспрессией генов, участвующих в биосинтезе фолиевой кислоты (Таблица 2), указывает на то, что Экспрессия ftl мешала С1-метаболизму Synechocystis .Например, наблюдали слегка повышенную экспрессию фолат-зависимых формилтрансфераз purN и purH (Таблица 1). Формилтрансфераза переносит формильную группу из 10-формил-ТГФ и высвобождает ТГФ во время биосинтеза пурина, поэтому их повышенная активность уменьшит пул 10-формил-ТГФ в exFTL, что также может повлиять на другие шунты метаболизма С1. Скорее всего, гетерологичный FTL изменяет баланс различных C1-интермедиатов, связанных с THF (см. Рисунок 6) в Synechocystis , что каким-то образом ощущается клеткой, что приводит к наблюдаемым изменениям в транскриптоме и метаболоме.Кроме того, сообщалось, что дегидрогеназная активность FolD ингибируется увеличенным пулом 10-формил-THF в E. coli FolD (Dev and Harvey, 1978). Это ингибирование FolD может влиять на равновесие между C1-звеньями 5,10-метилен-ТГФ и 5,10-метенил-ТГФ. Более того, на линиях клеток человека было показано, что C-1-тетрагидрофолатсинтаза, гомолог FolD, отвечает за поддержание окислительно-восстановительного баланса между NADP + и NADPH (Fan et al., 2014). Аналогичный эффект предполагался для футляра с опорой E.coli , демонстрирующий ауксотрофию по глицину и пурину (Sah et al., 2015). Следовательно, наши результаты показывают, что бифункциональный фермент FolD в Synechocystis может быть ограничивающим фактором для ассимиляции формиата в серин. Скорее всего, связанный с FTL дисбаланс в первичном метаболизме и метаболизме C1 препятствовал эффективному потоку формиата в метаболиты Synechocystis .
В отличие от наших ожиданий, что экспрессия FTL, особенно при добавлении формиата, в основном влияет на гены ферментов, связанных с метаболизмом C1 и биосинтезом пуринов, самые сильные изменения в содержании транскриптов наблюдались для генов, связанных с поглощением и ассимиляцией азота (Таблица 2).Наиболее выраженные различия были обнаружены для факторов, инактивирующих глутаминсинтазу, IF17 и IF7, с 15-кратным и 25-кратным повышением уровня транскрипта в exFTL по сравнению с WT (Таблица 2). Кроме того, ген, кодирующий NsiR4, регуляторную мРНК, ингибирующую трансляцию IF7 (Klähn et al., 2015), был репрессирован в exFTL по сравнению с WT, что согласуется с повышенным уровнем мРНК IF7. Несколько других генов, которые тесно связаны с метаболизмом азота у Synechocystis (Giner-Lamia et al., 2017) были значительно понижены в exFTL. Например, это было избыточно для генов, кодирующих транспортер нитратов / нитритов типа ABC ( nrtABCD ), пермеазу аммония / метиламмония ( amt1 / 2 ) или глутаматаммиаклигазу ( glnN ) (Таблица 2). . Все эти гены регулируются NtcA ( ntcA : 2-кратное усиление в exFTL, таблица 2), глобальным регулятором азота, который воспринимает уровень 2OG как меру клеточного статуса азота (Giner-Lamia et al., 2017). 2OG синтезируется в окислительной ветви цикла TCA, который в основном открыт для цианобактерий из-за отсутствия комплекса дегидрогеназы 2OG. Следовательно, 2OG является конечным продуктом окислительного разложения органического углерода и в основном используется в качестве предшественника углерода для ассимиляции аммиака в цикле глутаминсинтаза-глутаматсинтаза (GS / GOGAT). Следовательно, 2OG напрямую связывает метаболизм углерода и азота, что делает его основной сигнальной молекулой для определения отношения C / N in vivo (Zhang et al., 2018). Активность фактора транскрипции NtcA строго регулируется белком PII ( glnB ; 0,6-кратная экспрессия в exFTL, таблица 2), который в зависимости от количества 2OG и АТФ регулирует активность NtcA через адаптерный белок PipX. Например, при высоких соотношениях N / C с пониженным уровнем 2OG PII эффективно связывается с PipX, и NtcA, свободный от PipX, инактивируется, в то время как при низких соотношениях N / C с высокими количествами 2OG NtcA-2OG активируется из-за сильного PipX- связывание (Форчхаммер, Селим, 2020).Согласно этой модели, пониженный уровень 2OG в exFTL указывает на относительный богатый азотом статус в exFTL (Forchhammer and Lüddecke, 2016). Однако добавление формиата не изменяло уровень 2OG в exFTL, но обращало вспять экспрессию генов с низким содержанием азота, например, гены, участвующие в поглощении аммония и ассимиляции азота, увеличивались до уровня, подобного WT, а транскрипты для GS-инактивирующих факторов уменьшилось по сравнению с необработанным exFTL (Рисунок 3 и Таблица 2). Следовательно, противоположная регуляция экспрессии генов и содержания 2OG в присутствии или в отсутствие формиата делает прямое влияние передачи сигналов 2OG маловероятным, по аналогии с фенотипом, ограниченным C i , на что указывают изменения профиля метаболитов, описанные выше.В этом отношении интересно отметить, что экспрессия ftl вызывает независимое от формиата подавление генов, участвующих в синтезе молибдоптерина, который слегка стимулируется в exFTL при добавлении формиата (таблица 2). Молибдоптерин является важным кофактором для функции нитратредуктазы, первого фермента, инициирующего ассимиляцию неорганического азота (Berks et al., 1995; Lin and Stewart, 1998). Следовательно, обратимая регуляция генов биосинтеза молибдоптерина в exFTL с формиатом или без него может влиять на ассимиляцию нитратов и объяснять сильные эффекты экспрессии ftl на общую экспрессию N-связанных генов.
По сравнению с генами, связанными с N-ассимиляцией, гены, связанные с фиксацией углерода ( rbcL, rbcS ), а также с циклом TCA и гликолизом, меньше зависели от экспрессии FTL, чем от добавления формиата (Таблица 1). Гены, кодирующие RubisCO ( rbcL , rbcS ), были значительно ниже экспрессированы в exFTL по сравнению с WT в присутствии формиата. Некоторые гены ферментов первичного метаболизма углерода, такие как триозофосфат-изомераза, фосфофруктокиназа, стимулировались в exFTL при добавлении формиата (таблица 1).Все они участвуют в разложении органического углерода. Следовательно, их повышенная экспрессия может быть связана с потребностью в усиленной мобилизации запасов органического углерода из-за пониженного количества транскриптов RubisCO (например, Shinde et al., 2019). Единственными генами, кодирующими ферменты, участвующие в метаболизме C, которые демонстрируют противоположную регуляцию exFTL при добавлении формиата, были 2,3-дифосфоглицерат-независимая фосфоглицератмутаза и α-субъединица пируватдегидрогеназы E1 (Таблица 2).Эти данные указывают на то, что формиат, вероятно, не используется и не воспринимается как дополнительный источник углерода Synechocystis .
Заключение
Мы стремились установить путь ассимиляции формиата в cyanobacterium Synechocystis , чтобы проанализировать его потенциальный вклад в ассимиляцию CO 2 через цикл CBB. Наши эксперименты подтвердили, что эта цианобактерия представляет собой подходящее основание для такой попытки, учитывая, что внешний формиат натрия поглощается и низкие количества формиата хорошо переносятся без значительного воздействия на рост, фотосинтез, метаболом и транскриптом клеток WT.Однако экспрессия ftl вызвала дефекты в восприятии клетками статуса углерода и азота. Наши результаты показывают, что существует возможность дополнительной, еще не описанной сигнальной молекулы, участвующей в этом механизме восприятия. Несмотря на наблюдаемые изменения в содержании транскриптов, штамм exFTL рос так же хорошо, как и WT в наших стандартных условиях, а также в присутствии формиата. Эти данные показывают, что физиология Synechocystis ’может компенсировать довольно большие метаболические изменения из-за ремоделирования транскрипции без значительного воздействия на рост.
Многие другие цианобактерии были успешно сконструированы для производства большого разнообразия биотоплива и химического сырья, но наблюдаемые производственные титры обычно были низкими (обзор в Hagemann and Hess, 2018). Эти ограничения могут быть вызваны непреднамеренными побочными эффектами, как показано здесь, генетической нестабильностью или другими, пока неизвестными причинами (Jones, 2014). Чтобы свести к минимуму эти явления, необходимы комплексные генетические и метаболические изменения цианобактерий, как недавно было показано в тематическом исследовании производства бутанола с помощью Synechocystis (Liu et al., 2019). Наше исследование представляет собой шаг вперед в направлении возможного воздействия метаболической инженерии на цианобактерии.
Авторские взносы
MH разработал концепцию проекта. SS проводил физиологические и биохимические эксперименты. E-MB выполнила 14 экспериментов по поглощению С-формиата и выделению РНК. SL провел анализ 13 C-меченых протеиногенных аминокислот и оценку данных. ST выполнил измерения LC / MS-MS. VR и WH выполнили анализ микрочипов и оценку данных.SS, MH и E-MB провели окончательную оценку данных и написали рукопись с участием всех других авторов. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.
Конфликт интересов
Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.
Финансирование
Работа SS поддержана Китайским стипендиальным советом (CSC).Проект поддержан Федеральным министерством образования и исследований Германии (BMBF) через грант FormatPlant № 031B0194B для MH и анализ транскриптомики программой BMBF de.NBI-Partner (проект de.STAIR, грант № 031L0106B для WH) . Оборудование для ЖХ-МС в Университете Ростока финансировалось в рамках программы Hochschulbauförderungsgesetz (GZ: INST 264 / 125-1 FUGG).
Благодарности
Мы высоко ценим техническую помощь Клаудии Михл. Ген ftl был любезно предоставлен доктором.Аррен Бар-Эвен (MPI Molecular Plant Physiology, Потсдам-Гольм, Германия).
Дополнительные материалы
Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2020.01650/full#supplementary-material
Список литературы
Барсук, М. Р. и Прайс, Г. Д. (2003). Механизмы концентрирования СО2 у цианобактерий: молекулярные компоненты, их разнообразие и эволюция. J. Exp. Бот. 54, 609–622.DOI: 10.1093 / jxb / erg076
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Банг Дж. И Ли С. Ю. (2018). Ассимиляция муравьиной кислоты и СО2 сконструированной кишечной палочкой Escherichia coli , оснащенной реконструированными одноуглеродными путями ассимиляции. Proc. Natl. Акад. Sci. США 115, E9271 – E9279.
Google Scholar
Бар-Эвен А., Нур Э., Фламхольц А. и Майло Р. (2013). Дизайн и анализ метаболических путей, поддерживающих форматотрофный рост для культивирования микробов в зависимости от электричества. Biochim. Биофиз. Acta 1827, 1039–1047. DOI: 10.1016 / j.bbabio.2012.10.013
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Бар-Эвен А., Нур Э., Льюис Н. Э. и Майло Р. (2010). Дизайн и анализ синтетических путей фиксации углерода. Proc. Natl. Акад. Sci. США 107, 8889–8894. DOI: 10.1073 / pnas.0
6107
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Беркс, Б. К., Фергюсон, С. Дж., Мойр, Дж.В. Б. и Ричардсон Д. Дж. (1995). Ферменты и связанные с ними системы транспорта электронов, которые катализируют респираторное восстановление оксидов азота и оксианионов. Biochim. Биофиз. Acta Bioenerg. 1232, 97–173. DOI: 10.1016 / 0005-2728 (95) 00092-5
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Коллакова, Э., Гойер, А., Напонелли, В., Красовская, И., Грегори, Дж. Ф., Хэнсон, А. Д. и др. (2008). 10-формилтетрагидрофолат деформилазы Arabidopsis необходимы для фотодыхания. Растительная клетка 20, 1818–1832. DOI: 10.1105 / tpc.108.058701
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Дев, И. К., и Харви, Р. Дж. (1978). N10-Формилтетрагидрофолат является донором формила для глицинамид риботид трансформилазы в Escherichia coli . J. Biol. Chem. 253, 4242–4244.
Google Scholar
Деринг, В., Дарий, Э., Ишай, О., Бар-Эвен, А., и Бузон, М. (2018). Реализация восстановительного пути одноуглеродной ассимиляции в Escherichia coli путем направленной эволюции. ACS Synth. Биол. 7, 2029–2036. DOI: 10.1021 / acssynbio.8b00167
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Эйзенхут, М., Бауве, Х., и Хагеманн, М. (2007). Накопление глицина токсично для цианобактерий Synechocystis sp. штамм PCC 6803, но его можно компенсировать добавлением ионов магния. FEMS Microbiol. Lett. 277, 232–237. DOI: 10.1111 / j.1574-6968.2007.00960.x
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Айзенхут, М., Huege, J., Schwarz, D., Bauwe, H., Kopka, J., and Hagemann, M. (2008). Метаболомное фенотипирование ограничения неорганического углерода в клетках дикого типа и фотодыхательных мутантов cyanobacterium Synechocystis sp. штамм PCC 6803. Plant Physiol. 148, 2109–2120. DOI: 10.1104 / стр.108.129403
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Эванс, Л. Т. (1997). Адаптация и улучшение посевов: бесконечная задача. Phil. Пер. R. Soc.Лондон. B 352, 901–906. DOI: 10.1098 / rstb.1997.0069
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Фан, Дж., Йе, Дж., Камфорст, Дж. Дж., Шломи, Т., Томпсон, К. Б., и Рабиновиц, Дж. Д. (2014). Количественный анализ потока показывает, что производство НАДФН зависит от фолиевой кислоты. Природа 510, 298–302. DOI: 10.1038 / природа13236
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Гертнер, К., Клен, С., Ватанабе, С., Миккат, С., Шольц, И., Гесс, В.R., et al. (2019). Цитозин N4-Метилирование с помощью M.Ssp6803II участвует в регуляции транскрипции, точной настройке репликации ДНК и репарации ДНК у цианобактерий Synechocystis sp. PCC 6803. Перед. Microbiol. 10: 1233. DOI: 10.3389 / fmicb.2019.01233
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Георг Дж., Восс Б., Шольц И., Мичке Дж., Уайлд А. и Гесс В. Р. (2009). Доказательства важной роли антисмысловых РНК в регуляции генов цианобактерий. Мол. Syst. Биол. 5: 305. DOI: 10.1038 / msb.2009.63
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Джинер-Ламия, Дж., Роблес-Ренгель, Р., Эрнандес-Прието, М. А., Муро-Пастор, М. И., Флоренсио, Ф. Дж. И Футчик, М. Е. (2017). Идентификация прямого регулона NtcA во время ранней акклиматизации к азотному голоданию у цианобактерий Synechocystis sp, PCC 6803. Nucleic Acids Res 45, 11800–11820. DOI: 10.1093 / nar / gkx860
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Джордано, М., Бердалл, Дж., И Рэйвен, Дж. А. (2005). Механизмы концентрации СО2 в водорослях: механизмы, модуляция окружающей среды и эволюция. Annu. Rev. Plant Biol. 56, 99–131. DOI: 10.1146 / annurev.arplant.56.032604.144052
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Гойер, А., Коллакова, Э., Ла Диас де Гарса, Р., Куинливан, Э. П., Уильямсон, Дж., Грегори, Дж. Ф. и др. (2005). 5-Формилтетрагидрофолат является ингибирующим, но хорошо переносимым метаболитом в листьях Arabidopsis . J. Biol. Chem. 280, 26137–26142. DOI: 10.1074 / jbc.m503106200
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Хагеманн, М., и Хесс, В. Р. (2018). Системная и синтетическая биология для биотехнологического применения цианобактерий. Curr. Opin. Biotechnol. 49, 94–99. DOI: 10.1016 / j.copbio.2017.07.008
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Хан А., Шлейф Э. (2014). «Клеточная оболочка», в The Cell Biology of Cyanobacteria , eds F.Энрике и Х. Антония (Норфолк: Caister Academic Press), 29–87.
Google Scholar
Hanson, A. D., and Roje, S. (2001). Одноуглеродный метаболизм у высших растений. Annu. Rev. Plant Physiol. Завод Мол. Биол. 52, 119–137.
Google Scholar
Хоманн-Марриотт, М. Ф., и Бланкеншип, Р. Э. (2011). Эволюция фотосинтеза. Annu. Rev. Plant Biol. 62, 515–548.
Google Scholar
Кебейш, Р., Ниссен, М., Thiruveedhi, K., Bari, R., Hirsch, H.-J., Rosenkranz, R., et al. (2007). Хлоропластический обходной респираторный анастомоз увеличивает фотосинтез и производство биомассы у Arabidopsis thaliana . Nat. Biotechnol. 25, 593–599. DOI: 10.1038 / nbt1299
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ким С., Линднер С. Н., Аслан С., Ишай О., Венк С., Шанн К. и др. (2020). Рост E. coli на формиате и метаноле посредством восстановительного глицинового пути. Nat. Chem. Биол. 16, 538–545. DOI: 10.1038 / s41589-020-0473-5
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Kim, S.-J., Yoon, J., Im, D.-K., Kim, Y.H., и Oh, M.-K. (2019). Адаптивно эволюционировала Escherichia coli для улучшения способности использования формиата в качестве источника углерода в условиях отсутствия сахара. Biotechnol. Биотопливо 12, 1–12.
Google Scholar
Клен, С., Шаал, К., Георг, Дж., Баумгартнер, Д., Книппен, Г., Хагеманн, М., и др. (2015). SRNA NsiR4 участвует в контроле ассимиляции азота у цианобактерий, воздействуя на фактор IF7, инактивирующий глутаминсинтетазу. Proc. Natl. Акад. Sci. США 112, E6243 – E6252.
Google Scholar
Klemke, F., Baier, A., Knoop, H., Kern, R., Jablonsky, J., Beyer, G., et al. (2015). Идентификация светонезависимого фосфосеринового пути как дополнительного источника серина у цианобактерий Synechocystis sp.PCC 6803. Микробиология 161, 1050–1060. DOI: 10.1099 / mic.0.000055
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Куфрик, Г., Эрнандес-Прието, М. А., Кизельбах, Т., Миранда, Х., Вермаас, В., и Функ, К. (2008). Ассоциация малых CAB-подобных белков (SCP) Synechocystis sp. PCC 6803 с Фотосистемой II. Photosynthesis Res. 95, 135–145. DOI: 10.1007 / s11120-007-9244-3
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Лагард, Д., Беуф, Л., и Вермаас, В. (2000). Повышенное производство зеаксантина и других пигментов за счет применения методов генной инженерии к Synechocystis sp. штамм PCC 6803. Прил. Environ. Microbiol. 66, 64–72. DOI: 10.1128 / aem.66.1.64-72.2000
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Лигуд Р. К. (2002). Фотосинтез С (4): принципы концентрации СО (2) и перспективы его введения в растения С (3). J. Exp.Бот. 53, 581–590. DOI: 10.1093 / jexbot / 53.369.581
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Лин, Дж. Т., и Стюарт, В. (1998). «Ассимиляция нитратов бактериями», в Успехи в физиологии микробов, , изд. Р. К. Пул (Сан-Диего, Калифорния: Academic Press), 1–30. DOI: 10.1016 / s0065-2911 (08) 60014-4
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Лю X., Мяо Р., Линдберг П. и Линдблад П. (2019). Модульная инженерия для эффективного фотосинтетического биосинтеза 1-бутанола из CO 2 в цианобактериях. Energy Environ. Sci. 12, 2765–2777. DOI: 10.1039 / c9ee01214a
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Лонг, Б. М., Хи, В. Ю., Шарвуд, Р. Е., Рэй, Б. Д., Кейнс, С., Лим, Ю.-Л. и др. (2018). Карбоксисомная инкапсуляция CO2-фиксирующего фермента Rubisco в хлоропластах табака. Nat. Commun. 9: 3570.
Google Scholar
Лонг, С. П., Чжу, X.-G., Найду, С. Л., и Орт, Д. Р. (2006). Может ли улучшение фотосинтеза повысить урожайность? Plant Cell Environ. 29, 315–330. DOI: 10.1111 / j.1365-3040.2005.01493.x
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Маркс, К. Дж., Лаукель, М., Ворхольт, Дж. А., и Лидстрем, М. Е. (2003). Очистка формиат-тетрагидрофолат-лигазы из Methylobacterium extorquens AM1 и демонстрация ее потребности для метилотрофного роста. J. Bacteriol. 185, 7169–7175. DOI: 10.1128 / jb.185.24.7169-7175.2003
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Меджильяно, М.Р., Джахансуз, Х., Мацунага, Т. О., Кеньон, Г. Л., и Хаймс, Р. Х. (1989). Образование и использование формилфосфата N10-формилтетрагидрофолатсинтетазой: свидетельство того, что формилфосфат является промежуточным звеном в реакции. Биохимия 28, 5136–5145. DOI: 10.1021 / bi00438a034
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Reinholdt, O., Schwab, S., Zhang, Y., Reichheld, J.-P., Fernie, A.R., Hagemann, M., et al. (2019). Редокс-регуляция фотодыхания через митохондриальный тиоредоксин o1. Plant Physiol. 181, 442–457. DOI: 10.1104 / стр.19.00559
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Сах, С., Алури, С., Рекс, К., и Варшней, У. (2015). Перестройка одноуглеродного метаболического пути в Escherichia coli показывает эволюционное преимущество 10-формилтетрагидрофолатсинтетазы (Fhs) в выживании в условиях гипоксии. J. Bacteriol. 197, 717–726. DOI: 10.1128 / jb.02365-14
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Шульц, Дж., Детлафф, С., Фриче, У., Хармс, У., Шибель, Х., Дерер, В. и др. (1994). Анализ амидо черного: простой и количественный многоцелевой тест на адгезию, пролиферацию и цитотоксичность в культурах микропланшетов кератиноцитов (HaCaT) и других типов клеток, растущих адгезивно или в суспензии. J. Immunol. Методы 167, 1–13. DOI: 10.1016 / 0022-1759 (94)
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Швандер, Т., Шада фон Боржисковски, Л., Бургенер, С., Кортина, Н. С., и Эрб, Т. Дж. (2016). Синтетический путь фиксации углекислого газа in vitro . Science 354, 900–904. DOI: 10.1126 / science.aah5237
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Семин Б. К., Ловягина Е. Р., Александров А. Ю., Кауров Ю. Н., Новакова А. А. (1990). Влияние формиата на мессбауэровские параметры негемового железа частиц ФС II цианобактерий. FEBS Lett. 270, 184–186.DOI: 10.1016 / 0014-5793 (90) 81263-n
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Шевела Д., Климов В., Мессинджер Дж. (2007). Взаимодействие фотосистемы II с бикарбонатом, формиатом и ацетатом. Photosynthesis Res. 94, 247–264. DOI: 10.1007 / s11120-007-9200-2
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ши П. М., Заржицки Дж., Нийоги К. К. и Керфельд К. А. (2014). Введение синтетического CO 2 -фиксирующего фотодыхательного обходного анастомоза в цианобактерии. J. Biol. Chem. 289, 9493–9500. DOI: 10.1074 / jbc.C113.543132
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Шинде С., Сингапури С. П., Чжан Х., Калра И., Лю X., Морган-Кисс Р. М. и др. (2019). Метаболизм гликогена запускает фотосинтез через окислительный пентозофосфатный путь (OPPP) у цианобактерий. bioRxiv. [Препринт]. DOI: 10.1101 / 657304
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Юг, П.Ф., Кавана А. П., Лю Х. У. и Орт Д. Р. (2019). Пути метаболизма синтетического гликолата стимулируют рост сельскохозяйственных культур и урожайность на поле. Наука 363: eaat9077. DOI: 10.1126 / science.aat9077
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Стемлер А. и Радмер Р. (1975). Источник фотосинтетического кислорода в реакции Хилла, стимулированной бикарбонатом. Science 190, 457–458. DOI: 10.1126 / science.190.4213.457
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Suppmann, Б., и Соерс, Г. (1994). Выделение и характеристика устойчивых к гипофосфиту мутантов Escherichia coli : идентификация белка FocA, кодируемого опероном pfl, в качестве предполагаемого переносчика формиата. Мол. Microbiol. 11, 965–982. DOI: 10.1111 / j.1365-2958.1994.tb00375.x
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Черкез, Г. Г. Б., Фаркуар, Г. Д., и Эндрюс, Т. Дж. (2006). Несмотря на медленный катализ и неопределенную субстратную специфичность, все рибулозобисфосфаткарбоксилазы могут быть почти идеально оптимизированы. Proc. Natl. Акад. Sci. США 103, 7246–7251. DOI: 10.1073 / pnas.0600605103
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Towbin, H., Staehelin, T., and Gordon, J. (1979). Электрофоретический перенос белков из полиакриламидных гелей на нитроцеллюлозные листы: процедура и некоторые применения. Proc. Natl. Акад. Sci. США 76, 4350–4354. DOI: 10.1073 / pnas.76.9.4350
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Трюдо, Д.L., Edlich-Muth, C., Zarzycki, J., Scheffen, M., Goldsmith, M., Khersonsky, O., et al. (2018). Дизайн и реализация фотодыхания с сохранением углерода in vitro. Proc. Natl. Акад. Sci. США 115, E11455 – E11464.
Google Scholar
Восс, Б., и Гесс, В. Р. (2014). «Идентификация бактериальных некодирующих РНК с помощью дополнительных подходов», в справочнике по биохимии РНК , ред. Р.К. Хартманн, А. Биндерайф, А. Шён и Э. Вестхоф (Weinheim: Wiley-VCH), 787–800. .DOI: 10.1002 / 9783527647064.ch44
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Уитни, С. М., Хаутц, Р. Л., и Алонсо, Х. (2011). Расширение нашего понимания и возможностей для разработки природного фермента, связывающего CO2, Rubisco. Plant Physiol. 155, 27–35. DOI: 10.1104 / стр.110.164814
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ишай, О., Бузон, М., Деринг, В., и Бар-Эвен, А. (2018). Ассимиляция одного углерода in vivo посредством синтетического восстановительного глицинового пути в Escherichia coli . ACS Synth. Биол. 7, 2023–2028. DOI: 10.1021 / acssynbio.8b00131
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ишай, О., Гольдбах, Л., Тененбойм, Х., Линднер, С. Н., и Бар-Эвен, А. (2017). Инженерная ассимиляция экзогенного и эндогенного формиата в Escherichia coli . ACS Synth. Биол. 6, 1722–1731. DOI: 10.1021 / acssynbio.7b00086
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Чжан, К.-C., Zhou, C.-Z., Burnap, R. L., and Peng, L. (2018). Углеродно-азотный метаболический баланс: уроки Cyanobacteria . Trends Plant Sci. 23, 1116–1130. DOI: 10.1016 / j.tplants.2018.09.008
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
.