Как открыть хостел | HowToHostel Как открыть хостел … 
ЗОЛЛА — официальный сайт скидок
★ В визитнице.ру — каталог скидок и промокодов магазинов России
★ Официальный каталог скидок — В визитнице.ру
★ Каталог одежды онлайн 2020 — скидки и промокоды
★ Одежда по каталогам со скидкой
★ Каталог одежды — коллекция 2020
★ Дисконт интернет-магазинов России, Европы и Китая
★ Новые промокоды магазинов: Москва, Санкт-Петербург, Новосибирск, Екатеринбург, Казань …
★ Промокоды магазинов в городах: Уфа, Самара, Нижний Новгород, Саратов, Кемерово, Сочи, Пермь …
★ Распродажа в городах: Ростов-на-Дону, Киров, Воронеж, Волгоград, Краснодар, Ижевск, Пенза …
★ Кэшбэк магазинов в городах: Омск, Челябинск, Красноярск, Тюмень, Тольяти, Киров, Барнаул .
Большие размеры
Как делать замерыОдежда, дети 3-7 лет
| Размер | 26 | 28 | 28 | 30 | 30 |
| Российский размер | 3 года | 4 года | 5 лет | 6 лет | 7 лет |
| Рост (см) | 98 | 104 | 110 | 116 | 122 |
| Обхват груди (см) | 52 | 56 | 56 | 60 | 60 |
| Обхват талии (см) | 48 | 51 | 51 | 54 | 54 |
Одежда, девочки 7-13 лет
| Размер | 30 | 32 | 34 | 36 | 38 | 40 | 40 |
| Российский размер | 7 лет | 8 лет | 9 лет | 10 лет | 11 лет | 12 лет | 13 лет |
| Рост (см) | 122 | 128 | 134 | 140 | 146 | 152 | 158 |
| Обхват груди (см) | 60 | 64 | 68 | 72 | 76 | 80 | 80 |
| Обхват талии (см) | 54 | 57 | 60 | 63 | 66 | 66 | 66 |
Одежда, мальчики 7-13 лет
| Размер | 30 | 32 | 34 | 36 | 38 | 40 | 40 |
| Российский размер | 7 лет | 8 лет | 9 лет | 10 лет | 11 лет | 12 лет | 13 лет |
| Рост (см) | 122 | 128 | 134 | 140 | 146 | 152 | 158 |
| Обхват груди (см) | 60 | 64 | 68 | 72 | 76 | 80 | 80 |
| Обхват талии (см) | 54 | 57 | 60 | 63 | 66 | 69 | 69 |
Одежда для новорожденных
| Размер | 3 мес | 6 мес | 9 мес | 12 мес | 18 мес | 24 мес |
| Рост (см) | 62 | 68 | 74 | 80 | 86 | 92 |
| Обхват груди (см) | 40 | 44 | 44 | 48 | 48 | 52 |
Обувь, дети 1-3 года
| Размер обуви | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 |
| Длина стопы,мм | 105 | 110 | 115 | 125 | 130 | 135 |
| Длина стельки ориентировочная (зависит от модели обуви) | 110 | 115 | 120 | 130 | 135 | 140 |
Обувь, дети 3-7 лет
| Размер обуви | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 |
| Длина стопы,мм | 145 | 150 | 155 | 165 | 170 | 175 | 185 | 190 |
| Длина стельки ориентировочная (зависит от модели обуви) | 150 | 155 | 160 | 170 | 175 | 180 | 190 | 195 |
Обувь, дети 7-13 лет
| Размер обуви | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 |
| Длина стопы,мм | 195 | 205 | 210 | 215 | 225 | 230 | 235 |
| Длина стельки ориентировочная (зависит от модели обуви) | 200 | 210 | 215 | 220 | 230 | 235 | 240 |
Носки
| Размер носков | 18-20 | 20-22 |
|
|
|
|
|
| Длина стопы, см | 18-20 | 20-22 |
|
|
|
|
|
| Фактический размер обуви (ноги) | 29-31 | 32-34 |
|
|
|
|
|
InWear Matinique (Инвеа Матиник) — Калининград
Организации События Бонусы Люди
Участников: 272219 (+12)
Фирм: 10854 (+0)
Актуальных событий: 6
Информация
Название:InWear Matinique (Инвеа Матиник)
Город:Калининград
Сайт:
Телефоны:(401) 96-91-15
Адрес:Калининград, ул.
Генерала Озерова, д.17Б, ТЦ «Мега»
Модные изысканные модели женской одежды бренда «InWear» и хороший выбор элегантной одежды бренда Matinique для стильных мужчин в фирменных магазинах «InWear Matinique» в Калининграде.
Описание
В фирменных магазинах «InWear Matinique» в Калининграде представлен большой выбор стильной одежды от ведущих дизайнеров Дании. Покупателям предлагаются сезонные коллекции: мужские костюмы, платья, сорочки, жакеты, блузы и т.д., различные аксессуары. Все модели, в которых сочетаются скандинавская простота и лаконичность с изяществом и шиком, разработаны для молодой аудитории — жителей больших городов. В ассортименте магазинов «Инвеа Матиник» Вы можете приобрести одежду различных стилей: классическом, «casual», а также праздничные наряды – цены на все модели и аксессуары демократичные.Благодарим сайт Infoskidka. ru за предоставленные описания.Аналогичные фирмы
Одежда, обувь, аксессуары
Карта
05.06.2021 21:35:32
ПредложениеКомментарийКляузаВопросПоздравлениеПожеланиеОтвет сотрудника компанииВыберите категорию, к которой относится ваше сообщение:
Предложение
Кляуза
Вопрос
Поздравление
Пожелание
15. 12.2011 12:11:04
Процент скидки:
0%\ \ \Zolla йошкар ола каталог – Telegraph
Zolla йошкар ола каталогСкачать файл — Zolla йошкар ола каталог
Zolla Золла — бренд мужской и женской одежды по демократичным ценам. Свою историю в России Zolla начала в году в Йошкар-Оле. Сейчас порядка фирменных магазинов этой марки можно найти более чем в крупнейших городах по всей России. Классика бренда Zolla представляет собой мужскую и женскую коллекции — это Men и Women, также компаниям предлагает молодежную линию одежды — Jump by Zolla, коллекционную коллекцию — Zolla Concept.. Такие наряды созданы для жителей крупных городов. В предложенных моделях учтены все требования, которые предъявляют к одежде наши клиенты: Особенность марки ZOLLA заключается в идеальном сочетании одежды и аксессуаров не только в единой коллекции, но и с вещами из предыдущих и последующих коллекций. Йошкар-Ола А Абакан Алма-Ата Анадырь Архангельск Астана Астрахань Б Барнаул Белгород Биробиджан Благовещенск Брянск В Владивосток Владикавказ Владимир Волгоград Вологда Воронеж Г Горно-Алтайск Грозный Д Днепропетровск Донецк Е Евпатория Екатеринбург И Иваново Ижевск Иркутск Й Йошкар-Ола К Казань Калининград Калуга Караганда Кемерово Керчь Киев Киров Кострома Краснодар Красноярск Курган Курск Кызыл Л Липецк М Москва Магадан Майкоп Махачкала Минеральные Воды Минск Мурманск Н Набережные Челны Назрань Нальчик Нижний Новгород Новгород Новосибирск О Одесса Омск Оренбург Орёл П Пенза Пермь Петрозаводск Петропавловск-Камчатский Псков Р Ростов-на-Дону Рязань С Санкт-Петербург Салехард Самара Саранск Саратов Севастополь Симферополь Смоленск Сочи Ставрополь Сыктывкар Т Тамбов Тверь Тольятти Томск Тула Тюмень У Улан-Удэ Ульяновск Уфа Ф Феодосия Х Хабаровск Ханты-Мансийск Харьков Ч Чебоксары Челябинск Череповец Черкесск Чита Ш Шымкент Э Элиста Ю Южно-Сахалинск Я Якутск Ялта Ярославль. Сезонные акции в фирменных магазинах сети. Zolla JPG Solid Valentina. Женские комбинезоны ZOLLA Женская одежда, верх ZOLLA Женская одежда, низ ZOLLA Мужская одежда, верх ZOLLA Рубашка с коротким рукавом. Рубашка с длинным рукавом. Мужская одежда, низ ZOLLA Компания ZOLLA предоставляет товары в следующих категориях. Первомайская, Все адреса Все акции Belwest Gloria Jeans г. Волжск, Республика Марий Эл, ул. География охвата компании ZOLLA ZOLLA в Южно-Сахалинске , ZOLLA в Чите , ZOLLA в Улан-Удэ …. Контакты Связаться с нами Контактный e-mail: Авторизация Регистрация Пользовательское соглашение Политика компании в отношении обработки персональных данных на сайте. Разделы сайта Свадьба Школа 1 сентября Чёрная пятница Новые распродажи Cтатьи о шоппинге Карта скидок Промокоды Коллекции товаров. Ру в социальных сетях. Twitter Вконтакте Facebook Одноклассники. Приглашение в vip клуб. Приглашение в vip клуб Подпишитесь на рассылку эксклюзивных предложений и акций! ВСТУПИТЬ Вы можете отписаться в любое время Спасибо, мне это не интересно.
Каталог товаров «Zolla» (Йошкар-Ола)
Лореаль масло для волос восстанавливающее
Исла моос инструкция
Каталог товаров ZOLLA в Йошкар-Оле в июле 2017г: лучшие цены официального интернет магазина ZOLLA
Он мой волшебник текст
Схема камень ножницы бумага
Методы оценки результатов
Алма ата википедия на карте
ZOLLA: акции и скидки
Мехенди на запястье фото
Записаться к врачу через интернет череповец
Honda accord 2.4 технические характеристики
Zolla
Грицовский новомосковск расписание
Калина красная с медом лечебные свойства
Методы и способы монтажа конструкций
00117
субподадрес избирательно
адрес издательства
yumpu.com/xx/document/view/42772438/00117/56″ title=»адрес икона помощн»>адрес икона помощнадрес инд. 129626 г. мо
адрес инспекции тр
адрес института ге
адрес института пу
адрес интернет каф
адрес интим салона
yumpu.com/xx/document/view/42772438/00117/70″ title=»адрес ирландских п»>адрес ирландских падрес итальянского
адрес ифнс 29 г моск
адрес ифнс №27 юзао
адрес ифнс по г эле
адрес к телекм г. кр
адрес кадровых аге
yumpu.com/xx/document/view/42772438/00117/84″ title=»адрес калининськог»>адрес калининськогадрес кардиологиче
адрес кассы финэйр
адрес кафе афродит
адрес кафе палагин
адрес качановской
адрес киевского ра
адрес кинотеатра э
адрес китайских ав
адрес клиники revici в
адрес клиники инви
адрес клиники федо
адрес клуба dinco в ан
yumpu.com/xx/document/view/42772438/00117/112″ title=»адрес клуба знаком»>адрес клуба знакомадрес клуба подзем
адрес клубов знако
адрес кожно-венеро
адрес колонии №3 в
адрес комиссионных
адрес компании henders
yumpu.com/xx/document/view/42772438/00117/126″ title=»адрес компании аэр»>адрес компании аэрадрес компании кол
адрес компании рос
адрес компании юко
адрес кондратьевск
адрес консульства
адрес консульства
yumpu.com/xx/document/view/42772438/00117/140″ title=»адрес консульства «>адрес консульстваадрес консульство
адрес концерн авро
адрес корпорация д
адрес кпрф в нижнем
адрес красного кре
адрес кру в запорож
yumpu.com/xx/document/view/42772438/00117/154″ title=»адрес кукольного д»>адрес кукольного дадрес курьерской с
адрес лагеря орлен
адрес ледового дво
адрес лексус центр
адрес леруа мерлен
адрес лиу г. нижний
yumpu.com/xx/document/view/42772438/00117/168″ title=»адрес логистика тр»>адрес логистика традрес лютеранской
адрес магазин swarovski
адрес магазин левш
адрес магазин с пне
адрес магазина adidas
адрес магазина centrob
yumpu.com/xx/document/view/42772438/00117/182″ title=»адрес магазина ikea в»>адрес магазина ikea вадрес магазина motivi
адрес магазина saunala
адрес магазина zara в
адрес магазина ако
адрес магазина арх
адрес магазина биб
yumpu.com/xx/document/view/42772438/00117/196″ title=»адрес магазина в ки»>адрес магазина в киадрес магазина вес
адрес магазина гид
адрес магазина дзи
адрес магазина здо
адрес магазина инт
адрес магазина кен
yumpu.com/xx/document/view/42772438/00117/210″ title=»адрес магазина кос»>адрес магазина косадрес магазина лет
адрес магазина мар
адрес магазина мед
адрес магазина мир
адрес магазина нов
адрес магазина орд
адрес магазина псж
адрес магазина роз
адрес магазина све
адрес магазина сне
адрес магазина сте
адрес магазина тер
адрес магазина три
адрес магазина фол
адрес магазина цен
адрес магазина экс
адрес магазина яма
адрес магазинов в с
адрес магазинов ме
адрес магазинов са
адрес магазинов ян
адрес макдональдс
адрес марфин банк в
адрес мвд г. усть ку
адрес мебельного б
адрес меги + в росто
адрес медицинских
адрес международно
адрес металл профи
адрес миграционная
адрес мид украины г
адрес министерства
адрес министерства
адрес мирового суд
адрес мировых судь
адрес многофункцио
адрес молочной кух
адрес москва, рубле
адрес мотовилихинс
адрес мрэо в г елец
адрес мту интел в м
адрес музея булгак
адрес музея парово
адрес музыкального
адрес мусорного по
адрес н новгород нп
адрес налоговая ин
адрес налоговой в г
адрес налоговой ин
адрес налоговой ин
адрес налоговой сл
адрес наркоконтрол
адрес народный кон
адрес не зависимой
адрес немецкого по
адрес нии прометей
адрес новая почта в
адрес новой почти в
адрес номер телефо
адрес нотариуск ле
адрес нумизматичес
адрес оао лискигаз
адрес оати западно
адрес областного д
адрес областной на
адрес обучающих це
адрес общества сад
адрес овд г. экибас
Интернет-магазин Zolla. Каталог одежды Zola 2017 Итальянская компания Zolla начала свою работу в 1995 году. Компания быстро освоилась на мировом рынке и получила признание модников со всего мира.Компания Zolla начала покорять Россию в 2004 году, открыв здесь сеть фирменных магазинов. Российские покупатели сразу оценили неповторимый итальянский стиль. Сотрудники компании учитывают индивидуальные предпочтения отечественных потребителей, поэтому легко продаются на российском рынке. На сегодняшний день компания открыла более 200 магазинов в 82 городах России. Коллекция Zoll В одежде Zolla вы будете выглядеть оригинально, ярко и выделяться из толпы.Для коллекций дизайнеры выбирают свободный крой, множество карманов, модные капюшоны и неброские расцветки. В своем производстве компания использует только натуральные материалы, в которых чувствуется комфорт и надежность. Также на предприятии действует служба контроля, которая гарантирует, что публикуемая продукция является экологически чистой. В первую очередь одежда zolla Предназначена для повседневной носки. Коллекции производятся с использованием новейших инновационных технологий в Юго-Восточной Азии, где шьют эксклюзивные модели всемирно известных брендов.Также управляет производством в Китае и Индонезии. Сегодня представители компании Zolla контролируют весь процесс, что положительно сказывается на качестве продукции. Эта одежда для активных и энергичных людей, которые стараются быть в курсе всех последних событий, любят движение и наслаждаются каждым моментом своей жизни. Яркость характера, информационная жажда и оптимистичный взгляд на жизнь — вот что объединяет клиентов Zolla. Дизайнеры компании внимательно следят за последними модными изменениями и воплощают в своих коллекциях лучшие тенденции сезона.Поскольку основная целевая аудитория Zolla — молодежь, дизайнеры создают коллекции, исходя из своих предпочтений и вкусов. Молодые люди полны энергии и постоянно находятся в движении, поэтому компания Zolla создает коллекции не только качественно, но и практично. Такая одежда подчеркнет вашу индивидуальность и придаст ощутимый комфорт. МоделиCollection прекрасно сочетаются между собой и дорогой одеждой, а благодаря аксессуарам бренда Zolla можно создать свой индивидуальный стиль и образ. Компания обновляет свои коллекции практически каждые две недели, поэтому в фирменных магазинах Zolla вы всегда найдете новые актуальные модели, которые порадуют своим разнообразием и цветовой палитрой. Магазины компании Zolla Сеть фирменных магазинов Zolla выдержана в едином стиле, давно признанном среди постоянных покупателей. Успех компании во многом обусловлен лояльной ценовой политикой, немаловажное значение имеет опытный и вежливый обслуживающий персонал.Кроме того, продавцов-консультантов обучают известные стилисты. Так что вы можете полностью положиться на их вкус при выборе одежды и аксессуаров. Продавцы подробно расскажут, как правильно ухаживать за одеждой, чтобы она прослужила вам дольше. В магазинах высокая проходимость, так как здесь часто появляются и продаются новые модели одежды. Подробно ознакомиться с каталогом продукции Zolla можно на официальном сайте компании. Здесь вы можете легко и быстро оформить заявку на заказ товара.Фотографии хорошего качества и их оптимальный размер позволят рассмотреть все детали интересующей модели. Приобретая продукцию Zolla, вы получаете одежду отличного качества из натуральных материалов по доступным ценам. |
Комбинезон Золлы. Бренд молодежной одежды Zolla.
Российский бренд Zolla — довольно известный производитель женской, мужской и молодежной одежды, основанный в 2004 году в Москве. В маркетинговых целях и для привлечения клиентов торговая марка «Злав» сначала позиционируется как итальянский бренд.Логотип, написанный латинскими буквами, намекал на заморское происхождение бренда. Сегодня магазины одежды Zolla есть практически во всех регионах РФ. С момента основания бренда открыто более 350 фирменных бутиков.
Интернет-магазин «Злав» предлагает современную мужскую и женскую одежду, сочетающую комфорт, функциональный дизайн и стильный внешний вид. Помимо линии мужской и женской одежды в каталоге ралли есть линия Jump, предназначенная для молодежной аудитории.Это актуальные фасоны, модные трендовые решения и удобный крой.
В Каталоге одежды 2017 года коллекция Conception также представлена на официальном сайте, при создании особое внимание уделяется выбору тканей и проработке деталей. Это классические модели в новой оригинальной интерпретации. Интернет-магазин Zollao постоянно обновляется модными новинками, что предоставляет покупателям широкий выбор.
Преимущества бренда Zolla
Многих покупателей привлекает интернет-магазин Zolla, официальный сайт которого предлагает широкий выбор товаров.Брендовая одежда изготавливается по следующим принципам:
- свежий взгляд в соответствии с модными тенденциями;
- поиск и разработка новых решений;
- высококачественных материалов и фурнитуры;
- оригинальных стилей для всех категорий;
- экологически чистая продукция;
- демократичные цены — продажа и скидки.
В таких странах, как Шри-Ланка, Китай и Бангладеш открыты представительства компании, что позволяет контролировать производственный процесс на всех этапах и гарантировать высокое качество продукции.Обширный каталог одежды Zolla дает возможность подобрать целый гардероб на любой вкус, при этом вещи отличаются доступной ценой. Это легкие женственные платья, ультрамодные зауженные и прямые джинсы, мужские рубашки делового стиля, стильные пальто.
Каталог мужской одежды строгих силуэтов, прямого кроя, приглушенных тонов. Особое внимание дизайнеры Zolla уделяют деталям: рубашкам с упаковкой, необычному сочетанию фактур и ярким принтам на футболках.
«Золла» — это интернет-магазин, осуществляющий доставку по всей России, включая такие крупные города, как Омск, Пермь, Новосибирск, Красноярск, Тамбов, Кемерово, Барнаул, Воронеж, Томск, Оренбург, Самара, Курск, Пенза, Челябинск, Екатеринбург, Ульяновск, Уфа. , Ижевск, Казань, Ростов, Тюмень, Курск.
Постоянным покупателям нравится большой выбор и доступность цен в магазинах Zolla. Кроме того, бренд с завидной регулярностью обновляет ассортимент, позволяя находить подходящие вещи покупателям с разными вкусовыми предпочтениями.
Из истории бренда
Официально Zolla начала свое существование в 1995 году в Италии. Однако по этому поводу у многих возникают сомнения, потому что на официальном сайте компании есть список торговых точек только для России и СНГ, информации о заграничных нет.Считается, что итальянское происхождение бренда — это миф , призванный вызвать доверие у российских покупателей. И все же Zolla и сейчас многие считаются одеждой, несмотря на всю туманность истории ее появления.
Доподлинно известно, что в России компания существует с 2004 года и на сегодняшний день насчитывает более трехсот розничных магазинов. С 2002 года ведущим дизайнером компании является Giovanni Volumi . Однако, по словам владельцев бренда, в настоящее время над коллекциями работает бригад квалифицированных дизайнеров .
Стиль одежды и политика компании
Бренд Zolla ориентирован на молодежную целевую аудиторию и представлен одеждой для работы и отдыха. Компания производит вещи как для женщин, так и для мужчин. Основная коллекция разделена на 2 релевантные категории: « Женщины. » и « МУЖЧИНЫ. » Довольно это вещи классического стиля. или направления случайный Смарт. . Последняя — это повседневная одежда для людей, предпочитающих строгость и лаконичность, в том числе и вне работы.При разработке дизайна основных направлений специалисты компании, опираясь на общий классический стиль, стараются делать элементы, а также учитывать предпочтений и особенности российских потребителей .
Помимо основной, существует линейка « Jump », разработанная специально для младшего возраста. В нем это активно отражается. модные тенденции . Вещи этой коллекции отличаются более сложным и смелым дизайном.
Четвертая линия « Conception » Представлены исключительно женские вещи.Его модели отличаются более сложной проработкой и детализацией , а также повышенным вниманием к внедрению классических форм и требований актуальности и современных .
Все 4 правила сочетаются с общим комфортом и функциональностью одежды. Проще говоря, из трендов и объектов Дизайнеры отдают предпочтение последнему. Отличительной особенностью одежды Zolla является еще и то, что вещи в коллекциях не только хорошо сочетаются между собой, но и гармонично смотрятся в наборах с одеждой из прошлых коллекций бренда.Для тех, кто ценит комбинаторы , это будет существенным преимуществом.
Наличие команды дизайнеров вместо одной позволяет дважды в месяц пополнять ассортимент торговых точек, а пошив одежды на предприятиях, расположенных в Юго-Восточной Азии, способствует поддержанию цен на среднем уровне.
В целом бренд Zolla нашел своего покупателя в России. Об этом свидетельствует более чем 10-летняя история существования с постоянным расширением географии покрытия.Одежду Zolla нельзя назвать ультрамодной, все же основная ориентация на классику не позволяет бренду идти в ногу со временем. Однако из сборников он неплохой. Об интеллекте отношения « цена-качество » на вещи Zolla свидетельствует стабильный спрос среди российских покупателей. Это неудивительно, ведь при таком же невысоком уровне цен могут быть допущены только российские производители, такие как Ostin, yours, Oggi и т. Д.
Текст: Валентина Кайко
Zolla — крупнейшая торговая сеть ООО «Фактор».С 2004 года, т.е. с момента запуска, он очень динамично развивается, имеет почти 400 фирменных магазинов и расширяет географию в России.
Как работает сеть Zolla
Один из важнейших принципов сети — «Забота о покупателе, забота о сотрудниках». Соответственно, все композитные системы продуманы, магазины расположены в удобных местах, имеют особую архитектурную концепцию, которая способствует наиболее удачной презентации товаров.
магазинов в Москве расширили весь ассортимент торговой сети.Еще у нее есть интернет-магазин, на страницах которого рассказывается об основных модных линиях женской и мужской одежды. Получив общее представление об ассортименте, вы также можете узнать адрес ближайшего торгового центра Zolla, чтобы, посетив его, сделать выгодную покупку.
Бренд Zolla: стильно выглядеть, комфортно
Ясень продвигает собственный бренд и позиционирует весь ассортимент как стильный с учетом индивидуальных вкусов.
Вы молоды, амбициозны и уверены в себе? Для вас разработана линейка Jumpby Zolla.Предпочитаете неоклассику? Вам, несомненно, понравится линия Conception.
Помимо одежды в магазине представлены обувь, сумки и другие аксессуары. В одежде от Zolla вы всегда будете выглядеть стильно и комфортно.
Широко нейтрализующие антитела против ВИЧ-1 как новый аспект иммунного ответа
Acta Naturae. 2015 октябрь-декабрь; 7 (4): 11–21.
Щербаков Д. Н.
Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», Россия, 630559, Кольцово, Новосибирская область, Россия
Алтайский государственный университет, ул. Ленина, 61., 656049, Барнаул, Россия
А.Ю. Бакулина
Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», Кольцово, 630559, Новосибирская область, Россия
Новосибирский государственный университет, ул. Пирогова, 2, 630090, Новосибирск, Россия
Л.И. Карпенко
Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», Кольцово, 630559, Новосибирская область, Россия
А.А. Ильичев
Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», Кольцово, 630559, Новосибирская область, Россия
Государственный Научно-исследовательский центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», Кольцово, 630559, Новосибирская область, Россия
Алтайский государственный университет, ул. Ленина, 61., 656049, Барнаул, Россия
Новосибирский государственный университет, ул. Пирогова, 2, 630090, г. Новосибирск, Россия
Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями Лицензия Creative Commons Attribution, разрешающая неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии, что оригинальная работа правильно процитировано.
Эта статья цитируется в других статьях в PMC.Аннотация
Вирус иммунодефицита человека-1 (ВИЧ-1) обладает способностью уклоняться от адаптивный иммунный ответ из-за высокой частоты мутаций.Вскоре после открытия ВИЧ-1 первоначально предполагалось, что нейтрализация антител к вирус встречается редко или вообще не может быть вызван. В 90-е годы появились сообщает, что сыворотки отобранных ВИЧ-1-инфицированных лиц содержали антитела. способен нейтрализовать разные подтипы вирусов. Такие антитела были названы широко нейтрализующие антитела (bNAbs). С 2009 г. ведется разработка новых клеточные технологии активизировали исследовательские усилия, направленные на выявление новых bNAb с нейтрализующей способностью более 90% от первичных изолятов ВИЧ-1.Эти антитела обладают уникальными характеристиками, которые включают высокий уровень соматические мутации и необычно длинные вариабельные петли, пронизывающие гликановый экран Env ВИЧ-1 для контакта с поверхностью белка. В этом обзоре мы попытаемся обобщить последние данные о bNAb против ВИЧ-1 с точки зрения их взаимодействия с сайтами уязвимости гликопротеинов ВИЧ-1.
Ключевые слова: ВИЧ-1, gp120, gp41, bNAbs, широко нейтрализующие антитела
ВВЕДЕНИЕ
Отличительной чертой современной медицины последнего десятилетия было увеличение использования моноклональных антител, предлагающих целевые терапевтические эффекты для ряда расстройств.Успешный результат моноклонального лечения сообщалось о десятках коммерческих продуктов за последние 15 лет. Имеются экспериментальные данные по созданию и применению моноклональных антител. подробно рассмотрен в [1, 2]. Хотя механизмы, с помощью которых гуморальный ответ запускается и поддерживается, остается неуловимым, новое понимание широко нейтрализующие антитела к ВИЧ-1 (bNAbs) расширили наше понимание ответ антител.
Вирус иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), вызывающий приобретенный синдром иммунодефицита (СПИД) был обнаружен более 30 лет назад.В соответствии по данным ВОЗ, к концу года более 78 миллионов человек были диагностированы как ВИЧ-1. 2013 года, более половины из которых были зарегистрированы мертвыми. Безопасная и действенная вакцина против ВИЧ-1 может ограничить распространение ВИЧ-1 и впоследствии искоренить болезнь. Склонность ВИЧ-1 к быстрому накоплению мутаций, чтобы ускользнуть от хозяина. иммунные ответы представляют собой серьезное препятствие на пути развития эффективных вакцина. ВИЧ-1 теперь разделен на 9 различных подтипов, и их рекомбинантные формы [3].
До 1990 г. считалось, что нейтрализация ВИЧ-1, опосредованная антителами. в хосте было сокращено или даже отменено.В 90-х годах было обнаружено, что SERA ВИЧ-1-инфицированных людей содержали антитела, которые могли распознавать и нейтрализовать разные подтипы ВИЧ-1. Эти антитела широко назывались нейтрализующие антитела (bNAbs) [4]. С 2009 года с появлением новых клеточных анализов, наблюдается всплеск количества публикаций относящиеся к применению новых bNAbs. В этом обзоре суммируются текущие литература по bNAbs, которая предлагает новые возможности для вакцины против ВИЧ-1 дизайн.
СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ПОВЕРХНОСТНЫХ ГЛИКОПРОТЕИНОВ ВИЧ-1
ВИЧ-1 представляет собой вирус с сферической оболочкой диаметром 140 нм.Вирусный оболочка состоит из липидного бислоя, происходящего из плазматической мембраны инфицированные клетки с заякоренными в них шипами гликопротеина. Каждый вирусный всплеск — это тримерный гетеродимер, содержащий внешний гликопротеин gp120 и трансмембранный гликопротеин gp41, содержащий около 70–79 тримеров на вирионе поверхность [5]. Из всех вирусных белков только gp120 и gp41 имеют эпитопы для распознавания антител. Эти белки играют роль существенная роль в проникновении вируса в клетки-хозяева.
Гликопротеины gp120 и gp41, которые кодируются env , называются белками Env и транслируются в полноразмерный gp160. полипротеина с последующей тримеризацией и расщеплением фурин-подобной протеазой в купе Гольджи.Расщепленная молекула gp120 – gp41 захватывается в метастабильное состояние до перехода в энергетически более выгодное состояние. Как и другие слитые белки 1-го типа, эти триметрические структуры подвергаются рецепторному индуцированные конформационные изменения для увеличения экспозиции эктодомена gp 41 для слияния вирусной и клеточной мембран ( ). В кристаллография на отдельных компонентах gp120 и gp41, а также в контекст тримерного gp120 / gp41, был получен в последние годы, наряду с картирование участков связывания CD4 gp120 и корецепторов [6].
Проиллюстрировано взаимодействие тримерного Env с мембраной клетки-хозяина. GP120 субъединица связывается с рецепторами CD4, запуская конформационные перестройки в демаскировать сайт связывания корецепторов, изначально скрытый петлями V3 и V1 / V2. Взаимодействие с CCR5 или другим корецептором способствует слиянию и проникновению вируса
ВИЧ-1 заражает клетки через взаимодействие с рецепторами CD4 и хемокинов через трансмембранные домены, такие как CCR5 или CXCR4. Восприимчивые клетки включают Т клетки-помощники (Th), макрофаги, фолликулярные дендритные клетки, клетки Лангерганса, и микроглиальные клетки.Некоторые CD4-отрицательные типы клеток, несущие хемокин рецепторы также могут быть инфицированы. К ним относятся астроциты, клетки шейки матки, ректальные и клетки слизистой оболочки кишечника, эндотелиальные клетки капилляров головного мозга и шейки матки, и клетки роговицы. CD4 служит молекулой адгезии, которая стабилизирует вирусную контакт с мембраной клетки-хозяина [7]. Отсутствие прикрепления к корецепторам препятствует слиянию; вирус проникает путем эндоцитоза и обычно инактивируется при поглощении [7].
Способность ВИЧ-1 быстро накапливать мутации усиливает последовательность вариабельность вирусных белков.Однако домены внутри связывающих белков к CD4 и CCR5 сохраняются. gp120 содержит пять консервативных областей (C1-C5) которые разбросаны между 5 вариабельными областями (V1 – V5). Переменная области петли перекрывают константные области, чтобы избежать атаки антител [8]. После заражения антитела в первую очередь вызван против вариабельных областей и, из-за гипервариабельности, ВИЧ-1 уклоняется от иммунного надзора [9, 10]. Еще один механизм, с помощью которого вирус преодолевает иммунную защиту — гликозилирование поверхностных белков.Оно имеет было продемонстрировано, что gp120 содержит примерно 25 сайтов N-гликозилирования, которые образуют гликановый щит [8]. Мутации вызывают изменения в расположении последовательностей гликозилирования на gp120, таким образом изменение антигенного состава вирусной оболочки [11]. Мутант вируса, лишенный определенных вариабельных петель и сайты гликозилирования становятся более восприимчивыми к нейтрализации поликлональными сыворотка. Это наводит на мысль, что гипервариабельные петли маскируют согласованные эпитопы белка Env [12]. С участием Имея это в виду, давно существовало мнение, что нейтрализующие антитела против антигенов Env невозможно выявить в ходе болезни.
Действительно, знания об антителах, способных нейтрализовать ВИЧ-1, отсутствовали. в первые годы исследований ВИЧ-1. Предыдущие данные утверждали, что человеческий организм сам по себе не мог ограничить репликацию вируса из-за неспособность повысить нейтрализующие антитела или, если они установлены, их плохой нейтрализующая способность [18-20]. В последнее время появились сообщения о сыворотки ВИЧ-1-инфицированных людей, содержащие антитела, нейтрализующие оба лабораторно адаптированные штаммы и первичные изоляты [21-26].Это был первый предположили, что широко нейтрализующие антитела к ВИЧ-1 (bNAbs) возникают в небольшом доля пациентов, инфицированных ВИЧ-1 [20, 27]. С тех пор и в дальнейшем bNAb были обнаружены примерно у 30% инфицированных лиц с диагнозом в течение одного года после заражения [23, 28, 29]. Совсем недавно bNAb были обнаружены более чем в 50% случаев ВИЧ-1. перевозчики [30]. Важно отметить, что 1% инфицированные люди вырабатывают нейтрализующие антитела с сильным сродством к широкий спектр первичных изолятов ВИЧ-1, а также до 99% ВИЧ-1 изоляты, известные к настоящему времени [31].
Понимание bNAb и их взаимодействия с ВИЧ-1 может дать фундаментальные подсказки в нашем понимании этого явления, а также могут быть полезны в рациональный дизайн эффективной вакцины.
Тримерный комплекс ВИЧ-1 gp41-gp120 имеет 5 участков уязвимости к нейтрализация bNAbs. Каждый сайт несет перекрывающиеся эпитопы, распознаваемые разные bNAbs. Эти уязвимые места включают сайт связывания CD4. (CD4bs) gp120, сайта в gp120, на который нацелены PG9 и PG16 антитела, и проксимальная внешняя область мембраны (MPER) gp41, an эпитоп, прилегающий к петле V3 и охватывающий интерфейс gp120 / gp41.Пятерка представлены основные сайты уязвимости в .
Схема тримерной структуры гликопротеина оболочки ВИЧ-1 и сайтов показаны уязвимости, распознаваемые bNAbs. Α-Спирали показаны значком цилиндры, β-листы, со стрелками; петли, с тонкими линиями; гликозилированный аминокислотные остатки в кружках. Приведены подробные характеристики bNAbs. в . A — CD4bs на gp120 участвует в прикреплении CD4. Главным эпитопами являются петля D, петли V1 / V2, петли V5 и фланкирующие β-листы 23 и 24, эпитоп в β-листе 15, α-спираль 3, и эпитоп в β-листе 16.Восстановлена структура эпитопа. по данным [13]. В — эпитоп, состоящий из V1 / V2. Сайт распознавания антител — это область в β-конформация, включая гликаны по N156 и N160. Структура эпитопа построена на основе работы [14]. С — эпитоп находится на gp120. Сайты, участвующие в связывании: области β-листы 19, 17, 13, области V3 и V4, 4 и 3 α-спирали, гликаны по номерам N392, N386, N339, N332, N301 и N295. Строение эпитопа построено на основе по [15]. D — MPER-сайт, а линейный эпитоп на gp41.Регион в пределах MPER-сайта поддается Распознавание Структура эпитопа построена на основе работы [16]. E — эпитоп на интерфейсе gp120 / gp41. N-связанные гликаны в gp41, гликановый фрагмент в N637, N276 и N234 V5 и D регионы нацелены. Структура эпитопа построена на основе работы [17].
Краткая характеристика bNAbs с историей открытия и местонахождением привязки приведены в. Антитела, выделенные серым цветом, представляют собой bNAb первого поколения.
Стол
Характеристики bNAb против ВИЧ-1
| Сайт оболочки | Эпитоп (специфичность) | Обозначение антитела | Год поколения | Ширина нейтрализации ,% | Активность нейтрализации *, мкг / мл | Длина CDR h4, a.а. | Соматические мутации, %, замены аминокислот |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| gp41 MPER | ELDKWA [18] | 2F5 ** | 1992 | 55–67 [39, 40, 57, 58, 59] | 1,44 [40] | 24 | 15,2 |
| WFD (I / L) (T / S) NW (L / I) WYIK [60] | 4E10 ** | 1994 | 85 –100 [36, 39, 57, 58, 61, 62] | 1,62 [40] | 20 | 15.6 | |
| SLWNWFDITN [63] | Z13 ** | 2001 | 35 [62] | 40 [62] | 19 | 21 | |
| WNWFDITN [63] 2007 | 50 [36] | ||||||
| WFDITNWIWYIL / R [57] | 10E8 | 2012 | 98–99 [40, 573 0,28] | 9047 [40, 573 0,28] 9047 2222,1 | |||
| gp120 CD4bs | Петли D, V1 / V2, V5 и связывание с CD4 петля | b12 ** | 1991 | 35–75 [32, 38, 39, 61 ] | 2.82 [39] | 18 | 17,3 |
| Центральный эпитоп между внешним и внутренним доменами, остатков D474, M475 и R476 важны для распознавания [64] | HJ16 | 2010 9025 36 [61] | 8,01 | 21 | 36,7 | ||
| Петли D, V1 / V2, V5 и связывание с CD4 петля | VRC01 | 2010 | 88–93 [38, 40, 44, 45, 51, 57, 58, 65] | 0.09 [45] 0,92 [48] | 14 | 38,8 | |
| Петли D, V1 / V2, V5 и связывание с CD4 петля | VRC02 | 2010 | 90–91 [38, 40 ] | 0,13 [40] | 14 | 34,9 | |
| Петли D, V1 / V2, V5 и связывание с CD4 петля | VRC03 | 2010 | 51–59 40448 [38, 58] | 0,08 [44] | 16 | 34,9 | |
| Петли D, V1 / V2, V5 и связывающие CD4 петли | PGV04 (VRCPG04) | 2011 77– | 9048 [40, 44, 46, 51]0.14 [40] | 16 | 38,2 | ||
| Петли D, V1 / V2, V5 и CD4-связывание петля | Ch41 (VRCCh41) | 2011 | 84–91 [40, 44 , 66] | 0,02 [44] | 15 | 31,9 | |
| Петли D, V1 / V2, V5 и связывающие CD4 петли | Ch43 (VRCCh43) | 2011 9025 441 | ] | 0,24 [44] | 15 | 31,9 | |
| Петли D, V1 / V2, V5 и CD4 | NIh55-46 | 2011 | 84–86 [40, 45, 48] | 0.08 [45] 0,41 [48] | 18 | 44 | |
| Петли D, V1 / V2, V5 и CD4 | 45-46 G54W | 2011 | 92 [48473] | 0,04 [48]18 | 44 | ||
| Петли D, V1 / V2, V5 и CD4 | 3BNC117 | 2011 | 86–92 [40, 45, 58] | 40473 0,06 [40, 45, 58]0,06 [ ] | 12 | 36,9 | |
| Петли D, V1 / V2, V5 и CD4 | 12A12 | 2011 | 92–96 [40, 45] | 0.07 [40] | 15 | 34 | |
| Петли D, V1 / V2, V5 и CD4 | VRC23 | 2013 | 65-80 [40, 58] | 0,58 [40] | Нет данных | Нет данных | |
| V1 / V2 gp120 петля | Гликаны на N160 и N156 и область β-листа в петле V1 / V2 | PG9 | 2009 | 77–83 [39, 40, 51, 57, 58] | 0,08 [ 58] | 30 | 15.4 |
| PG16 | 2009 | 73–79 [39, 40, 57, 58] | 0,02 [57] | 30 | 16,8 | ||
| 5 PGTT 78 [51] | 0,29 | 33 | 22,8 | ||||
| CH01 | 2011 | 46 [50] | 3,75 [50] | 24 | 23,3 | Три гликана в N332, N339, N392 | 2G12 | 1994 | 28–39 [39, 40, 61] | 1.45 [40] | 16 | 33,6 |
| Комплексный тип N-гликанов в N332 и области петли V3 | PGT121 | 2011 | 70 [51] | 0,03 | 26 | ||
| Гликаны с высоким содержанием маннозы и область β-листа на С-конце петли V3 | PGT128 | 2011 | 72 [51] | 0,02 | 21 | 27,9 |
gp120
интерфейс gp120 /
gp41
(кластер из
N-гликанов, заканчивающихся
остатком галактозы
в N611 и
N637)
155
[56]
контуров
bNAbs ПЕРВОГО ПОКОЛЕНИЯ
Историю широко нейтрализующих антител можно разделить на два периода. Первые исследования bNAbs появились в начале 1990-х годов и сообщали о b12, 2G12, 2F5, Z13 и 4E10 антитела.
Первым bNAb, полученным с использованием фагового дисплея, был b12, который связывается с консервативными gp120 CD4bs [4]. Он был получен как Fab-фрагмент антитела, созданный из библиотеки антител фагового дисплея из костный мозг ВИЧ-1-инфицированного непрогрессора.Клонирование переменной область тяжелой цепи и легкой цепи Ig была случайной; поэтому такие комбинации могут не встречаться в природе [32].
2G12 bNAb распознает α1 → 2 остатка маннозы на gp120, расположенном близко к петлям V3 и V4 [33], и имеет уникальную структуру. Тяжелые цепи пересекаются, причем каждая легкая цепь связаны с константной областью одной тяжелой цепи и вариабельной областью другая тяжелая цепь. Благодаря такому расположению Fab-фрагменты необычайно плотно прилегают друг к другу. выровнен.Такое антитело было получено только из одной донорской библиотеки. Эпитоп распознается 2G12, является конформационно чувствительным, сильно зависит от гликозилирование аспарагина в C2-, C3-, C4-доменах и петле V4. ;
BNAb 2F5 и 4E10 взаимодействуют с линейными перекрывающимися эпитопами на основе MPER-область gp41, проявляющая полиреактивность с двухвалентным гетеролигированием [34]. У них есть способность сильно связываются с MPER с одним Fab-фрагментом, в то время как другой Fab-фрагмент демонстрирует низкое сродство к другой молекуле-мишени на поверхности ВИЧ-1.В гетерогенное связывание лиганда, по-видимому, увеличивает нейтрализующую активность против первичных изолятов ВИЧ-1 [34].
Подобно b12, Z13 был получен из библиотеки комбинаторного фагового дисплея. К повышают аффинность, в паратоп введены аминокислотные замены для генерировать клональный вариант Z13e1 с 35-кратным увеличением связывания вместимость [19, 35, 36].
Исследования, проведенные с псевдовирусами ВИЧ-1 разных подтипов, показали: продемонстрировали, что bNAbs первого поколения демонстрируют умеренную ширину и эффективность нейтрализации.Достижение желаемой эффективности против широкого спектра Изоляты ВИЧ-1 требуют высоких концентраций этих bNAb, что препятствует прогресс в этой области. При этом пассивная иммунизация макак комбинация нейтрализующих Abs b12, 4E10, 2F5 и 2G12 дает полный защита от вызова SHIV89.6P [37]. Эти результаты стимулировали дальнейшие исследования, направленные на выявление новых bNAbs.
bNAbs ВТОРОГО ПОКОЛЕНИЯ
Многочисленные попытки создать bNAb с высокими превосходными характеристиками не привели к успеху. увенчались успехом.Первые bNAb с повышенной эффективностью и активностью против широкий спектр первичных изолятов ВИЧ-1 был идентифицирован только в 2009 году. Успешный результат был достигнут за счет использования трех стратегий: (i) Скрининг сывороток хронически инфицированных ВИЧ-1, содержащих антитела с высокой аффинностью и перекрестной реактивностью, (i) применение новых подходов к отбору и сортировке B-клеток, (iii) разработка высокопроизводительных процедуры получения человеческих моноклональных антител.
Идентификация VRC01 [38] и PG9 / PG16 [39] был прорывом в область bNAbs в 2009–2010 гг.Отличительные особенности этих антител сильные профили нейтрализации широкого спектра первичных ВИЧ-1 изоляты и повышенная эффективность; Требуется в 10 раз более низкий уровень антител для защиты от bNAbs первого поколения. VRC01, например, показывает нейтрализующая активность до 93%; PG9 / PG16, до 80% первичного ВИЧ-1 изолятов, тогда как b12 (bNAb первого поколения) нейтрализует только 35% [40].
VRC01 был произведен с использованием новой стратегии, использованной Mascola et al. al .[38], что привело к антигенно измененный гликопротеин, представляющий собой замещенное ядро gp120, называется восстановленным стабилизированным сердечником (RSC). Для облегчения селективности эпитопа с использованием RSC в качестве зонда, CD4bs были сохранены, вариабельные области от 1 до 3 удалены, а другие антигенные области изменены, чтобы уменьшить узнавание. В кроме того, зонд ΔRSC с нарушенным связыванием b12 использовали в качестве отрицательного контроль. Были идентифицированы сыворотки, содержащие NAb к CD4bs, с последующим выделением. индивидуальных B-клеток с использованием зондов RSC и ΔRSC, конъюгированных с флуорохромы.Отдельные B-клетки, связанные с зондом RSC, были отсортированы. Одноклеточный ОТ-ПЦР [41] применяли для амплификации кДНК. кодирование легких и тяжелых цепей отдельных клеток с последующим клонированием в векторы экспрессии, которые воссоздали константу тяжелой и легкой цепи регионы [38].
PG9 и PG16 были идентифицированы раньше, чем VRC01, с использованием высокой пропускной способности стратегия [39]. Активированные В-клетки были проверен на антитела с нейтрализующей активностью против первичного ВИЧ-1 изолирует JR-CSF и SF162 и связывается с рекомбинантными gp120 и gp41 белки.Желаемые гены антител были получены из пяти клонов В-клеток. Все пять антител были протестированы на нейтрализующую активность против группы псевдовирусы, а PG9 и PG16 демонстрируют исключительную нейтрализацию были выбраны широта и сила действия.
УЯЗВИМОСТЬ УЯЗВИМОСТИ ENV, НАПРАВЛЯЕМЫЕ bNAbs
Сайт связывания CD4
После открытия bNAb второго поколения, VRC01 очень понравился внимание из-за его замечательной аффинности к CD4bs тримерного gp120 ВИЧ молекула.CD4bs, одно из наиболее уязвимых мест, содержит эпитоп. для bNAbs ( ). Существование широко реагирующих гипотеза антител была высказана ранее [24, 42]. Однако помимо моноклонального антитело b12, другие широко нейтрализующие антитела не были идентифицированы. Использовать высокопроизводительных стратегий дали три новых bNAb (VRC01, VRC02 и VRC03), которые распознают CD4bs. Все они оказались соматическими вариантами с общие характеристики, при этом VRC03 показывает ограниченную широту нейтрализации [38].VRC01 имеет ряд отличительных Особенности. Во-первых, он имеет высокий уровень соматических мутаций в своей переменной. регионы. Соматические мутации обычно составляют 5–20% генов VH, тогда как VRC01 может нести до 40%. Во-вторых, вариабельный домен VRC01 близко родственные по структуре рецептору CD4 на Т-хелперных клетках. VRC01 отображает структурная мимикрия взаимодействия CD4 с CD4bs на gp120 [13]. Точное нацеливание — это ключ детерминанта высокой нейтрализующей способности. Несмотря на близкое сходство с рецептор CD4, взаимодействие VRC01 с gp120 значительно различается.На связывания CD4 с тримерным Env, субъединица gp120 претерпевает структурные конформации; напротив, в том же контексте VRC01 перехватывает gp120 в состоянии что предотвращает проникновение вируса [43].
После идентификации VRC01 появилось множество CD4bs-связывающих антител для например, PGV04, CH 3 0–34 [44], 3BNC117, 3BNC60, 3BNC55, 12A21, 12A12, 8ANC195, 8ANC131, 8ANC134, NIh55-46, 1NC9 и 1B2530 [45] были получены с использованием той же стратегии.
Несмотря на то, что все эти антитела нацелены на эпитоп CD4bs на gp120, наблюдаются значительные различия в способе действия [45].Например, определенные антитела, связанные с мономерный gp120 запускает конформационные изменения, напоминающие те, которые требуют место при связывании CD4, что не показано для других антител [46]. Несмотря на общие структурные характеристики, CD4bs-связывающие антитела могут кодироваться разными генами, позволяя подклассифицировать VRC01-подобные антитела [47].
Особый интерес представляет NIh55-46G54W, идентификация которого стала возможной. благодаря конструкции на основе структуры на основе NIh55-46, антитела с исключительная эффективность и широта действия против CD4bs.Рентгеноструктурные данные для структура NIh55-46, связанного с gp120, показала, что от глицина к триптофану замена в позиции 54 увеличивает интерактивную поверхность между антитело и вирусный гликопротеин. Попытки провести замену дали NIh55-46 G54W , обладающий повышенной эффективностью и широтой действия [48].
Сайт узнавания PG9 и PG16
Антитела PG9 и PG16, которые являются соматическими вариантами, демонстрируют отличные широта нейтрализации.PG9 нейтрализует 78% псевдовирусов; PG16, 73%. Важно отметить, что эффективность нейтрализации, проявляемая обоими антителами, может варьироваться. на два порядка. Эти различия можно объяснить незначительным изменение сайтов связывания эпитопа, распознаваемых PG9 и PG16.
Гликозилирование N156 и N160 может влиять на взаимодействие PG9 и PG16 с триметик gp120. В отличие от 2G12, для связывания которого требуются гликаны на N332, N339 и N392 [33], PG9 и PG16 включают оба Сайты N-гликозилирования и аминокислоты gp120, охватываемые V2 и V3 петли [39].Искусственные белки имитация распознавания PG9 в контексте gp120 пролила свет на структуру PG9 привязан к цели. CDR h4 петля широко нейтрализующего антитела ВИЧ PG9 играет важную роль в стабилизации комплекса PG9-gp120. Его исключительно длинная петля из 30 аминокислотных остатков проникает через гликановый щит на gp120, чтобы обеспечить доступ к поверхности белка вокруг петель V2 и V3. В Кончик петли имеет структуру в виде головки молотка, образованную двумя β-листами. В внешний β-лист антитела CDR h4 образует четыре водородные связи с β-лист у основания петли V2 ( ).Рядом водородные связи, отрицательно заряженный CDR h4 взаимодействует с связанные с аспарагином сахарные фрагменты в N160 и N156 также вносят вклад во взаимодействие PG9 с эпитопом. Петля V3 и сахарные фрагменты составляют более 50% площадь контактной поверхности [14]. Этот структура частично имитирует естественную конформацию тримерного gp120, связанного с клеточная мембрана [49].
Показан Fab-фрагмент PG9 в комплексе с gp120 ВИЧ-1. Переменная и консервативные домены тяжелой и легкой цепей выделены зеленым и серым цветом, соответственно.Расширенная петля CDR h4, доходящая до поверхности gp120, имеет вид выделено. Β-листы CDR h4, важные для связывания, отмечены красным цветом. В N-гликаны в N160 и N156, через которые проникает CDR h4 PG9, показаны как синие облака. Схема воспроизведена на основе конструкций 3У4Э и 3DNN из банка данных Protein
PG9 и PG16 были среди первых bNAb, использованных для нацеливания на второй сайт Env уязвимость, охватывающая аминокислотные остатки в петлях V1 / V2 и олигоманноза фрагменты в положениях 160 и 156 (или 176) ( ).Позже на, CH01-04 [50] и PGT141-145 [51], которые распознают тот же эпитоп, были получено [14]. Отличительной чертой этих антитела — это их исключительно длинные CDR h4, позволяющие проникать между гликаны и взаимодействие с ними, что способствует усиленному связыванию с gp120 [14].
Область петли V3
Ключевые остатки другого уязвимого места на Env ВИЧ-1 — высокоманнозные. гликаны на N332 и области в петле V3 ( ) [15]. Спектр антител распознавание этого эпитопа включает антитело 2G12 первого поколения, потому что сахарные фрагменты gp120, которые включают эпитоп 2G12, образуют конформацию аналогичен антителу 2G12.Все другие родственные bNAbs не распознают только углеводы, но и аминокислоты ( ). В структурная форма этих антител и родственных PG9 антител позволяет им распознавать и пробивать гликановый экран gp120 для взаимодействия с белком поверхность под. Антитела PGT127-128 имеют удлиненную петлю CDR h3, и антитело PGT135 имеет расширенную петлю CDR h2 [52].
PGT135 использует длинные петли (CDR h2 и CDR h4) для проникновения через гликановый щит gp120, при этом решающую роль играет CDR h4.Помимо контакта с белком основной цепи gp120, фланкирующие гликаны также вносят вклад во взаимодействие. CDR h4 взаимодействует с гликанами по N332, N386 и N392; CDR h2, только на N386. Нравиться PG9, PGT135 и углеводы эпитопа составляют менее половины общие контакты взаимодействия, которые значительно способствуют связыванию энергия [15]. Сахарные фрагменты играют второстепенную роль роль в распознавании другим bNAb, PGT128, который взаимодействует с гликаном на N332, а N301 использует CDR h4 и CDR h3.Антитело удлиненное Петля CDRh3 образует обширные взаимодействия с gp120. Важно отметить, что умеренный β-лист на конце CDR h4 и β-листовая структура V3 на gp120 делает водородные связи критическими для распознавания Env PGT128 [53].
Следует отметить PGT121 и 10-1074, которые, в отличие от 2G12, PGT135 и PGT128, связываются с N-гликанами сложного типа, присутствующими в низком проценте на gp120, скорее чем высокоманнозные N-гликаны [54].
Если расположить в порядке по вовлечению углеводов в взаимодействия, 2G12 занимает первое место по степени полной углеводной зависимости, затем PGT135, который ориентирован на связывание с сахарными фрагментами и в меньшей степени аминокислотным остаткам, и PGT128, связывание которого сильно зависит от CDR h4 контактирует с аминокислотами V3.Интересно, что широта нейтрализации увеличивается с вкладом белок-белковых взаимодействий в эпитоп связывание ( ). Вследствие этого нейтрализация ширина, по-видимому, определяется вкладом белка в контактную поверхность. Хотя гликан-распознающее антитело 2G12 может нейтрализовать изоляты ВИЧ-1, оно демонстрирует умеренную ширину. Напротив, антитела, нацеленные на белок поверхность увеличилась в ширину. Выявление гликан-распознающих bNAb скорее всего, проявит слабую потенцию.
MPER регион
Четвертый крупный сайт уязвимости — gp41 MPER. Как и CD4bs, это очень законсервированы и преследовались в качестве мишени для bNAbs. MPER имеет решающее значение для слияние и проникновение в клетку, следовательно, сохранение MPER необходимо для поддержания его функции. Действительно, bNAb, распознающие эту цель, были первыми. идентифицированы. Однако сыворотки ВИЧ-инфицированных, содержащие bNAb против нескольких изолятов ВИЧ показали, что MPER-связывающие bNAb встречаются нечасто.В кроме того, моноклональные MPER-направленные антитела 2F5, 4E10 и Z13 являются полиреактивный. В то же время Хуанг и др. (2012) сообщили о MPER-специфическое антитело, названное 10E8 ( ), который нейтрализовали ~ 98% исследованных изолятов ВИЧ-1 и не проявили полиреактивности.
область интерфейса gp120 / gp41
Только недавно были обнаружены широко нейтрализующие антитела, которые распознают как gp120, так и gp41. [17, 55]. Как и большинство bNAb (за исключением антител, специфичных к gp41 MPER), эти антитела связывают Env через гликановые взаимодействия, но, напротив, критические контакты гликанов расположен на gp41.Все антитела структурно аналогичны другим известным антителам. bNAbs. 8ANC195 имеет длинную петлю CDR h4 и выступающий FWR3 (третья структура регион) своей тяжелой цепи. Эта структура преодолевает маскировку гликанов. вносятся сахарами в N234 и N276 для контакта с петлями gp120 D и V5 [17]. PGT151 имеет удлиненные CDR h4 и Петли CDR L1, которые способны распознавать Env в принятой конформации до слияния вирусной мембраны с мембраной клетки-мишени. Интересно, что антитела, подобные PGT151-158, могут опосредовать антителозависимый клеточная цитотоксичность [56].
ВЫВОДЫ
Идентификация и исследование bNAb против ВИЧ-1 были прорыв в понимании гуморального иммунного ответа. Хотя эти антитела не могут предотвратить развитие СПИДа из-за ВИЧ и удаления вируса, bNAbs проводят нас через замечательную адаптацию B-клеточного иммунитета в ответ на изощренный агент, такой как ВИЧ-1.
Многочисленные исследования bNAb показали, что иммунная система хозяина может адаптировать ускользающие мутации ВИЧ-1, генерируя необычные антитела, направленные на скрытые консервативные эпитопы.
Исключительная нейтрализующая способность bNAb в основном обусловлена их состав. Во-первых, их гипервариабельные петли несут аминокислотные вставки в CDR. петли, особенно CDR h4, которые обеспечивают доступ к поверхности белка gp120 через гликановый навес. Во-вторых, bNAbs способны приспосабливать разнообразие эпитопов за счет изменения конформации их петель.
Отличительной особенностью множественных bNAb против ВИЧ-1 является задействование сахарные фрагменты, украшающие гликопротеин оболочки gp120 / gp41 ВИЧ-1.В Помимо белок-белковых взаимодействий, углеводы эффективно дополняют распознавание эпитопа антител. Интересно, что гликановые фрагменты могут вносят равный или более половины в общую энергию связи.
Еще одна важная стратегия — структурная мимикрия. Были созданы антитела к сайту прикрепления CD4 на gp120 ВИЧ-1, которые имитируют важные молекулярные детали взаимодействия CD4-gp120.
Эти идеи подтверждают, с одной стороны, потенциал иммунной системы. решить проблему разнообразия патогенов и, с другой стороны, разработка вакцины, приводящая к выявлению мощных bNAb против ВИЧ-1
Благодарности
Авторы выражают благодарность А.И. Шаповал за критическое прочтение рукопись и Е.А. Колосовой за прекрасные иллюстрации. Эта работа была при поддержке RSF (договор № 14-14-00660).
Глоссарий
Сокращения
| ВИЧ-1 | Вирус иммунодефицита человека 1 типа |
| СПИД | синдром приобретенного иммунодефицита |
| bNAbs | 901 901 нейтральный антитела к Env -1 вирусный белок оболочки|
| gp | гликопротеин |
| CD4 | трансмембранный гликопротеиновый рецептор для ВИЧ-1 |
| CD4bs | CD4 рецептор CC12 |